DNA双螺旋 - DNA Double Helix

用 A260 紫外吸光度法测定 DNA 浓度：浓度 (µg/mL) = A260 × 稀释倍数 × 转换系数 ÷ 光程 (cm)。经验系数：双链 DNA 1 OD = 50 µg/mL，单链 DNA 1 OD = 33 µg/mL（RNA 为 40，见配套 RNA 工具）。1 µg/mL = 1 ng/µL；输入洗脱体积即可得总量 µg。附带 0.1–1.5 线性范围判读：低于 0.1 噪声为主，高于 1.5 探测器可能饱和，需稀释重测。纯度请用 OD260/280 工具判断。来源：Marmur & Doty 1961/1962、Sambrook & Russell、Thermo Fisher NanoDrop 技术资料。仅供教学与实验规划，请以校准仪器为准。

将 DNA 质量浓度换算为摩尔浓度：nM = µg/mL × 10⁶ ÷ (每碱基对质量 × bp)。平均质量按 NEB 惯例：双链 DNA 650 Da/bp、单链 DNA 330 Da/nt（Promega 用 660，同理）。注意常见陷阱：分母若用 10⁻³ 得到的是 µM 而非 nM（差 1000 倍）。1 µg/mL = 1 ng/µL 两种单位通用；输入体积即可得总 pmol 与每 µL 分子数（衔接 dna-copy-number 工具）。来源：NEB NEBioCalculator、Promega BioMath、Avogadro 常数 6.022×10²³。仅供教学与实验规划。

把 DNA 质量浓度换算成每微升分子拷贝数：copies/µL = 浓度(g/µL) × 阿伏伽德罗常数 ÷ (长度bp × 660 g/mol)。支持 ng/µL（NanoDrop 常用，与 µg/mL 等值）、pg/µL（Qubit 量程）与 µg/µL；附 pmol/µL 摩尔量换算与可选体积的总拷贝数。参考值：5000 bp 质粒 50 ng/µL → 9.12×10⁹ 拷贝/µL（0.0152 pmol/µL）。提醒：660 Da/bp 为平均值，对质粒/基因组/扩增片段足够精确，精确寡核苷酸请逐碱基求和；A260 会因 RNA/游离核苷酸污染而高估，准确定量建议用荧光染料法。来源：SI 2019 阿伏伽德罗常数、Thermo Fisher 惯例、Sambrook & Russell。仅供实验规划。

按 1:1 结合平衡从单点数据估算 Kd：当蛋白过量时结合分数 f = [P]÷([P]+Kd)，故 Kd = [P]×(1−f)÷f；f = 0.5 时 Kd 恰等于蛋白浓度。两种输入：直接输入结合分数（0–1），或由荧光各向异性 f = (r−r游离)÷(r结合−r游离) 换算。附带 ΔG° = RT·ln(Kd)（默认 25°C）。判读：<1 nM 极强、1–100 nM 强（典型转录因子/核酸酶靶点）、100 nM–1 µM 中等、>1 µM 弱（查盐浓度、poly(dI-dC) 竞争）。假设：平衡、1:1、蛋白远过量；完整滴定曲线应整体拟合。来源：Cantor & Schimmel、Heyduk & Lee 1990、Lakowicz。仅供教学与实验规划。