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Calculadora de concentração de RNA (A260, 1 OD = 40 µg/mL)
Determina a concentração de RNA pela absorbância UV a 260 nm: concentração (µg/mL) = A260 × fator de diluição × 40 ÷ trajeto óptico (cm). A constante do RNA é 1 OD = 40 µg/mL, entre o DNA de fita dupla (50) e o de fita simples (33); um erro comum é manter a constante 50 do dsDNA, superestimando o RNA em 25%. 1 µg/mL = 1 ng/µL; informe o volume de eluição para o rendimento total. Inclui a janela linear 0.1–1.5; RNA puro deve dar OD260/280 ≈ 2.0 (DNA ~1.8) — avalie a pureza com a ferramenta de razão. Trabalhe sem RNase e no gelo. Fontes: Marmur & Doty, Sambrook & Russell, Manchester 1995, Thermo Fisher. Apenas para educação e planejamento.
Execução
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Exemplos
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Guia de uso da ferramenta
Veja quando usar esta ferramenta, o que ela suporta e como os usuários a aplicam.
Fatos principais
Categoria
Education
Tipos de entrada
number
Tipo de saída
json
Cobertura de exemplos
4
API pronta
Sim
Visão geral
Calcule a concentração de RNA a partir da absorbância A260, do fator de diluição e do comprimento do trajeto óptico. A ferramenta usa a constante de RNA de 1 OD = 40 µg/mL e também pode estimar a concentração em ng/µL, o rendimento total e se a leitura está na faixa linear de 0,1 a 1,5.
Quando usar
Quantificar RNA total ou mRNA após uma leitura de absorbância a 260 nm.
Corrigir o resultado de uma amostra diluída ou medida com um trajeto óptico diferente de 1 cm.
Estimar o rendimento total de RNA quando o volume de eluição for conhecido.
Como funciona
1Informe a absorbância A260 da amostra, medida contra o tampão de eluição sem RNase.
2Insira o fator de diluição e o comprimento do trajeto óptico em centímetros.
3A calculadora aplica a fórmula concentração = A260 × fator de diluição × 40 ÷ trajeto óptico.
4Opcionalmente, informe o volume de eluição para obter o rendimento total em µg e verifique a faixa linear da leitura.
Casos de uso
Quantificação de RNA extraído antes de etapas de biologia molecular.
Comparação do rendimento de diferentes preparações ou volumes de eluição.
Planejamento da quantidade de RNA disponível para experimentos, usando leituras espectrofotométricas.
Exemplos
1. Quantificação de RNA total diluído
Pesquisador de biologia molecular
Contexto
Uma preparação de RNA total foi diluída 1:5 e apresentou A260 = 0,4 em uma cubeta com trajeto óptico de 1 cm. O volume de eluição foi de 250 µL.
Problema
Determinar a concentração de RNA e o rendimento total da preparação.
Como usar
Informe A260 = 0,4, fator de diluição = 5, trajeto óptico = 1 cm e volume de amostra = 250 µL.
Casas decimais: 2.
Resultado
A concentração calculada é 80 µg/mL, equivalente a 80 ng/µL. O rendimento total é de 20 µg em 250 µL, e a leitura está dentro da faixa linear de 0,1 a 1,5.
2. Leitura de RNA abaixo da faixa linear
Técnico de laboratório
Contexto
Uma amostra de RNA não diluída apresentou A260 = 0,08 em uma cubeta de 1 cm, com volume de eluição de 50 µL.
Problema
Estimar a concentração apesar da absorbância baixa e identificar se a leitura oferece uma quantificação confiável.
Como usar
Informe A260 = 0,08, fator de diluição = 1, trajeto óptico = 1 cm e volume de amostra = 50 µL.
Perguntas frequentes
Qual constante é usada para calcular a concentração de RNA?
A ferramenta usa 1 OD a 260 nm = 40 µg/mL para RNA.
Como o fator de diluição afeta o resultado?
A concentração calculada é multiplicada pelo fator de diluição usado antes da leitura.
O que acontece se eu informar um volume de eluição?
A ferramenta calcula o rendimento total em µg a partir da concentração e do volume informado.
O que significa uma leitura A260 abaixo de 0,1?
A leitura está abaixo da faixa linear indicada e pode ser menos confiável; considere medir a amostra menos diluída.
A calculadora avalia a pureza do RNA?
Ela apresenta o lembrete de que RNA puro costuma ter OD260/280 próxima de 2,0, mas não calcula essa razão.