Quelle constante est utilisée pour l’ARN ?

Le calcul utilise 1 OD = 40 µg/mL pour l’ARN.

La concentration en µg/mL est-elle égale à celle en ng/µL ?

Oui, 1 µg/mL équivaut numériquement à 1 ng/µL.

Pourquoi faut-il saisir le facteur de dilution ?

Il permet de retrouver la concentration de l’échantillon initial à partir de la mesure diluée.

Que signifie une absorbance A260 inférieure à 0,1 ?

La lecture est sous la plage linéaire indicative et peut être moins fiable ; l’outil le signale.

Le calculateur mesure-t-il la pureté de l’ARN ?

Non. Il rappelle qu’un ARN pur présente généralement un rapport A260/A280 proche de 2,0, mais ne calcule pas ce rapport.

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Calculateur de concentration d'ARN (A260, 1 OD = 40 µg/mL)

Détermine la concentration d'ARN par absorbance UV à 260 nm : concentration (µg/mL) = A260 × facteur de dilution × 40 ÷ trajet optique (cm). La constante de l'ARN est 1 OD = 40 µg/mL, entre l'ADN double brin (50) et simple brin (33) ; une erreur fréquente consiste à garder la constante 50 de l'ADNdb, ce qui surestime l'ARN de 25%. 1 µg/mL = 1 ng/µL ; indiquez le volume d'élution pour le rendement total. Inclut la fenêtre linéaire 0.1–1.5 ; un ARN pur doit donner un OD260/280 ≈ 2.0 (ADN ~1.8) — évaluez la pureté avec l'outil de ratio. Travaillez sans RNase et sur glace. Sources : Marmur & Doty, Sambrook & Russell, Manchester 1995, Thermo Fisher. Uniquement pour l'éducation et la planification.

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2 exemples

Préparation d'ARN total : A260 = 0.4, dilution au 1:5

Un prep d'ARN total dilué au 1:5 lit A260 = 0.4 en cuve de 1 cm. Concentration = 0.4 × 5 × 40 / 1 = 80 µg/mL = 80 ng/µL d'ARN. Les 250 µL d'éluion contiennent 80 × 0.25 = 20 µg au total — de quoi alimenter une vingtaine de qPCR types, la lecture restant dans la plage linéaire 0.1–1.5. Avec la constante ADNdb 50 on aurait affirmé à tort 100 µg/mL.

{"result":"RNA concentration = 80 µg/mL (80 ng/µL); total 20 µg in 250 µL.","metadata":{"input":{"a260":0.4,"dilutionFactor":5,"pathLengthCm":1,"sampleVolumeUl":250},"result":{"constantUgMlPerOd":40,"concentrationUgMl":80,"concentrationNgUl":80,"totalUg":20,"measurementQuality":"within linear range (0.1–1.5)"}}}

Lecture faible : A260 = 0.08 sous la plage linéaire

Un échantillon d'ARN non dilu lit A260 = 0.08, sous la borne inférieure (~0.1) de la plage linéaire — le bruit représente alors une grande part du signal. L'outil calcule quand même 0.08 × 1 × 40 / 1 = 3.2 µg/mL (3.2 ng/µL) et 0.16 µg dans 50 µL, mais signale la lecture pour re-mesurer moins dilué (ou passer à un dosage fluorométrique, plus sensible à faible concentration).

{"result":"RNA concentration = 3.2 µg/mL (3.2 ng/µL); reading below the linear range — re-measure less diluted or use a fluorometric assay.","metadata":{"input":{"a260":0.08,"dilutionFactor":1,"pathLengthCm":1,"sampleVolumeUl":50},"result":{"constantUgMlPerOd":40,"concentrationUgMl":3.2,"concentrationNgUl":3.2,"totalUg":0.16,"measurementQuality":"below linear range — reading too low for reliable quantitation, measure a higher concentration or a shorter dilution"}}}

Entrées

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5 réglages

RéglagesAjustez formats, plages, nombres et modes.5

Absorbance à 260 nmnumberRequisMeasured absorbance of the (diluted) sample at 260 nm, blanked against the RNase-free elution buffer.Facteur de dilutionnumberRequisSample-to-total dilution before measurement (1 = measured undiluted).Longueur du trajet optique (cm)numberRequisCuvette path length (1 cm standard; microvolume readers may use 0.1–1 cm).Volume d'échantillon (µL, optionnel)numberOptionnelTotal elution volume in µL; enter 0 to skip the total-yield calculation.DécimalesnumberOptionnel

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1. Quantification d’un ARN total dilué

2. Lecture faible sous la plage linéaire

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Calculateur de pureté des acides nucléiques (OD260/280)

Calculateur du dosage BCA (courbe standard)

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3. Correction d’une mesure avec microvolume