Quantifica proteína pelo método BCA (ácido bicinconínico, 562 nm) com curva-padrão: cole as linhas «concentração(µg/mL), A562» e as absorbâncias das amostras; a ferramenta ajusta por mínimos quadrados (inclinação, intercepto, R²), inverte c = (A−b)/m e aplica o fator de diluição (µg/mL e mg/mL). Leituras fora da faixa são marcadas como extrapolação; abaixo do branco, rejeitadas. Especificidades do BCA: tolera ~5% de detergente (melhor que Bradford para lisados); mas DTT/TCEP/β-mercaptoetanol (>1 mM) e EDTA alto reduzem/queleram o Cu²⁺ e inflacionam a leitura — remova-os antes; faixa útil ~20–2000 µg/mL (Micro BCA 0,5–20). Fonte: Smith 1985 Anal Biochem. Apenas para educação.
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Guia de uso da ferramenta
Veja quando usar esta ferramenta, o que ela suporta e como os usuários a aplicam.
Fatos principais
Categoria
Education
Tipos de entrada
textarea, number
Tipo de saída
json
Cobertura de exemplos
4
API pronta
Sim
Visão geral
A Calculadora do ensaio BCA quantifica proteínas a 562 nm a partir de uma curva-padrão. Cole os padrões com concentração e A562, informe as absorbâncias desconhecidas e o fator de diluição para obter concentrações em µg/mL e mg/mL.
Quando usar
Para calcular a concentração de proteína em amostras desconhecidas pelo método BCA.
Para ajustar uma curva-padrão por mínimos quadrados e consultar inclinação, intercepto e R².
Para corrigir o resultado pelo fator de diluição e identificar leituras fora da faixa da curva.
Como funciona
1Insira uma linha por padrão no formato concentração em µg/mL e A562, separados por vírgula, ponto e vírgula, tabulação ou espaço.
2Informe uma leitura A562 por linha para cada amostra desconhecida.
3A ferramenta ajusta a relação entre concentração e absorbância e calcula c = (A − b) / m.
4O resultado aplica o fator de diluição e apresenta a concentração em µg/mL e mg/mL, com sinalização de extrapolação quando aplicável.
Casos de uso
Quantificação de proteínas em lisados celulares preparados com detergentes compatíveis com BCA.
Cálculo da concentração de amostras diluídas antes de uma análise bioquímica.
Avaliação da qualidade de uma curva-padrão por inclinação, intercepto e R².
Exemplos
1. Quantificação de lisado em tampão com Triton
Pesquisador de bioquímica
Contexto
O pesquisador tem uma curva-padrão de BSA entre 0 e 2000 µg/mL e duas leituras de lisado obtidas a 562 nm.
Problema
Determinar as concentrações das amostras sem diluição prévia.
Como usar
Cole os padrões de concentração e A562, informe 0,735 e 1,640 como absorbâncias desconhecidas e use fator de diluição 1.
Padrões: 0/0,000; 200/0,200; 500/0,500; 1000/1,000; 2000/2,000. Absorbâncias: 0,735 e 1,640.
Resultado
A curva apresenta inclinação 0,001, intercepto 0 e R² 1,00. As amostras resultam em 735 µg/mL e 1640 µg/mL, ou 0,735 mg/mL e 1,64 mg/mL.
2. Correção de uma amostra diluída cinco vezes
Técnica de laboratório
Contexto
Uma amostra foi diluída cinco vezes antes do ensaio BCA. A curva inclui um branco com A562 de 0,030.
Problema
Recuperar a concentração da amostra original a partir da leitura diluída.
Como usar
Insira os padrões 0/0,030; 200/0,230; 500/0,530; 1000/1,030, informe A562 0,530 e use fator de diluição 5.
Perguntas frequentes
Quais dados devo inserir?
Insira os padrões como concentração em µg/mL e A562, uma linha por padrão, além das absorbâncias das amostras.
Como o cálculo da concentração é feito?
A ferramenta ajusta uma reta por mínimos quadrados e inverte a equação usando c = (A − b) / m.
Para que serve o fator de diluição?
Ele corrige a concentração calculada para representar a amostra antes da diluição. Use 1 para uma amostra não diluída.
O que significa uma leitura fora da faixa?
Ela é marcada como extrapolação, pois está fora da faixa de concentrações usada na curva-padrão.
Quais interferentes são importantes no BCA?
DTT, TCEP, β-mercaptoetanol acima de 1 mM e EDTA alto podem interferir. Detergentes em torno de 5% são geralmente tolerados.