Cuantifica proteína por el método BCA (ácido bicincronínico, 562 nm) con curva estándar: pegue las líneas «concentración(µg/mL), A562» y las absorbancias desconocidas; la herramienta ajusta por mínimos cuadrados (pendiente, ordenada, R²), invierte c = (A−b)/m y multiplica por la dilución, devolviendo µg/mL y mg/mL. Las lecturas fuera del rango se marcan como extrapolación; las inferiores al blanco se rechazan. Claves del BCA: tolera ~5% de detergente (mejor que Bradford para lisados); pero DTT/TCEP/β-mercaptoetanol (>1 mM) y EDTA alto reducen o quelan Cu²⁺ e inflan la lectura — elimínelos antes; rango útil ~20–2000 µg/mL (Micro BCA 0,5–20). Fuente: Smith 1985 Anal Biochem. Solo para educación.
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Guía de uso de la herramienta
Conoce cuándo usar esta herramienta, qué admite y cómo la aplican los usuarios.
Datos clave
Categoría
Education
Tipos de entrada
textarea, number
Tipo de salida
json
Cobertura de ejemplos
4
API disponible
Sí
Resumen
La calculadora del ensayo BCA cuantifica proteínas a partir de estándares de concentración y lecturas de absorbancia A562. Ajusta una curva lineal por mínimos cuadrados, calcula pendiente, ordenada y R², y convierte las absorbancias desconocidas en µg/mL y mg/mL aplicando el factor de dilución.
Cuándo usarlo
Cuando necesitas estimar la concentración de proteína de muestras mediante un ensayo BCA a 562 nm.
Cuando tienes datos de estándares y absorbancias desconocidas para construir una curva estándar.
Cuando debes corregir la concentración calculada por un factor de dilución de la muestra.
Cómo funciona
1Introduce un estándar por línea con el formato concentración en µg/mL y A562, separados por coma, punto y coma, tabulación o espacio.
2Pega una absorbancia A562 desconocida por línea e indica el factor de dilución aplicado a la muestra.
3La herramienta ajusta la relación lineal entre concentración y absorbancia mediante mínimos cuadrados y muestra la pendiente, la ordenada y R².
4Invierte la ecuación c = (A−b)/m, aplica la dilución y devuelve la concentración en µg/mL y mg/mL; las lecturas fuera del rango se marcan como extrapolación.
Casos de uso
Cuantificar proteínas en lisados que contienen aproximadamente un 5 % de detergente, donde BCA puede ser más adecuado que Bradford.
Verificar si las absorbancias de muestras desconocidas quedan dentro del rango de la curva estándar.
Calcular la concentración original de una muestra diluida antes de una aplicación experimental.
Ejemplos
1. Curva estándar BCA de 0–2000 µg/mL
Estudiante de bioquímica
Contexto
Una serie de estándares de proteína presenta una relación lineal entre concentración y absorbancia A562.
Problema
Convertir las lecturas 0,735 y 1,640 en concentraciones de proteína.
Cómo usarlo
Introduce los cinco estándares y pega las dos absorbancias desconocidas. Mantén el factor de dilución en 1.
Estándares: 0, 0.000; 200, 0.200; 500, 0.500; 1000, 1.000; 2000, 2.000. Desconocidas: 0.735 y 1.640. Factor de dilución: 1.
Resultado
La curva obtiene pendiente 0,001, ordenada 0 y R² = 1,00. Las muestras se calculan como 735 µg/mL y 1640 µg/mL, ambas dentro del rango de la curva.
2. Muestra diluida cinco veces con blanco
Investigador de laboratorio
Contexto
Los estándares incluyen un blanco de 0,030 de absorbancia y una muestra se analizó después de una dilución ×5.
Problema
Determinar la concentración de la muestra original a partir de una lectura A562 de 0,530.
Cómo usarlo
Introduce los estándares con blanco, añade la absorbancia 0,530 y establece el factor de dilución en 5.
Preguntas frecuentes
¿Qué datos necesito introducir?
Necesitas los estándares como concentración en µg/mL y A562, además de una o varias absorbancias desconocidas.
¿Qué representa el factor de dilución?
Indica cuánto se diluyó la muestra antes del ensayo. Usa 1 si la muestra no se diluyó.
¿Qué unidades muestra el resultado?
La concentración se muestra en µg/mL y, cuando corresponde, en mg/mL.
¿Qué ocurre con una lectura fuera del rango de estándares?
La herramienta la marca como extrapolación, porque queda fuera del intervalo usado para ajustar la curva.
¿Qué limitaciones debo considerar en un ensayo BCA?
DTT, TCEP, β-mercaptoetanol por encima de 1 mM y EDTA alto pueden interferir; elimínalos antes del ensayo. La herramienta es solo educativa.
La curva ajusta A = 0,001c + 0,03. La concentración en el ensayo es 500 µg/mL y la concentración original, tras aplicar la dilución, es 2500 µg/mL (2,5 mg/mL).