Welche Eingaben benötigt der Rechner?

Er benötigt Standardwerte aus Konzentration in µg/mL und A562 sowie die A562-Werte der unbekannten Proben.

Wie wird der Verdünnungsfaktor verwendet?

Der Rechner multipliziert die aus dem Assay berechnete Konzentration mit dem eingegebenen Verdünnungsfaktor. 1 steht für eine unverdünnte Probe.

Welche Ergebnisse werden ausgegeben?

Ausgegeben werden die berechneten Probenkonzentrationen in µg/mL und mg/mL sowie Steigung, Achsenabschnitt und R² der Standardkurve.

Was passiert bei Messwerten außerhalb der Standardkurve?

Werte außerhalb des Bereichs werden als Extrapolation markiert.

Welche Stoffe können einen BCA-Test beeinflussen?

DTT, TCEP, β-Mercaptoethanol über 1 mM und hohe EDTA-Konzentrationen können Cu²⁺ beeinflussen und Werte erhöhen. Sie sollten vorher entfernt werden.

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BCA-Proteinbestimmungs-Rechner (Standardkurve)

Quantifiziert Protein nach der BCA-Methode (Bicinchoninsäure, 562 nm) mit Standardkurve: fügen Sie die Zeilen «Konzentration(µg/mL), A562» und die Probenabsorptionen ein; das Werkzeug fittet nach kleinsten Quadraten (Steigung, Achsenabschnitt, R²), invertiert c = (A−b)/m und wendet den Verdünnungsfaktor an (µg/mL und mg/mL). Werte außerhalb der Palette werden als Extrapolation markiert; unterhalb der Leerprobe abgelehnt. BCA-Besonderheiten: verträgt ~5 % Detergens (besser als Bradford für Lysate); aber DTT/TCEP/β-Mercaptoethanol (>1 mM) und hohes EDTA reduzieren/chelatisieren Cu²⁺ und erhöhen die Werte — vorher entfernen; Arbeitsbereich ~20–2000 µg/mL (Micro BCA 0,5–20). Quelle: Smith 1985 Anal Biochem. Nur für Ausbildung.

Ausführung

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2 Beispiele

200–2000 µg/mL-Kurve: 0,735 → 735 µg/mL, 1,640 → 1640 µg/mL

Eine BSA-Verdünnungsreihe für den Standard-BCA-Bereich (0–2000 µg/mL) fitzt A562 = 0,001c mit R² = 1,00. Lysatvertiefungen mit 0,735 und 1,640 ergeben 735 und 1640 µg/mL — beide in der Kurve — und ohne Vordünnung sind das die Probenkonzentrationen. BCA ist hier genau die richtige Wahl, weil die Probe aus einem Triton-Lysepuffer stammt, der einen Bradford-Assay ruinieren würde.

{"result":"2 unknown(s) quantified; first: A562 = 0.73 → 735.00 µg/mL (0.735 mg/mL) in the sample (dilution ×1).","metadata":{"fit":{"slope":0.001,"intercept":0,"r2":1},"unknowns":[{"absorbance":0.73,"sampleConcUgMl":735}]}}

Kurve mit Blindwert und 5-fach-Verdünnung: A562 0,530 → Stammlösung 2500 µg/mL (2,5 mg/mL)

Bei leichtem Blindwert (Achsenabschnitt 0,03) fitten Standards 0/200/500/1000 µg/mL mit 0,03/0,23/0,53/1,03 zu A = 0,001c + 0,03. Eine 5-fach verdünnte Probe mit 0,530 ergibt im Ansatz (0,530 − 0,03)/0,001 = 500 µg/mL, also 2500 µg/mL = 2,5 mg/mL im Stock — deutlich über dem üblichen 1–2 mg/mL für SDS-PAGE-Proben und eine gute Erinnerung, weiter zu verdünnen, bis die Werte in Kurvenmitte liegen.

{"result":"1 unknown(s) quantified; first: A562 = 0.53 → 2500.00 µg/mL (2.5 mg/mL) in the sample (dilution ×5).","metadata":{"fit":{"slope":0.001,"intercept":0.03,"r2":1},"unknowns":[{"absorbance":0.53,"assayConcUgMl":500,"sampleConcUgMl":2500,"mgPerMl":2.5}]}}

Eingaben

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4 Optionen

InhaltHaupteingaben einfügen oder eingeben.2

Protein-Standards (µg/mL, A562)textareaPflichtOne standard per line: concentration in µg/mL, then A562 (comma, semicolon, tab, or space separated).Unbekannte Absorptionen (A562)textareaPflichtOne sample A562 reading per line.

EinstellungenFormate, Bereiche, Zahlen und Modi anpassen.2

Verdünnungsfaktor der ProbenumberPflichtDilution applied to the sample before the assay (1 = undiluted).DezimalstellennumberOptionales Feld

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1. Standard-BCA-Kurve für zwei Lysatproben

2. Verdünnte Probe mit Blindwert zurückrechnen

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