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按 BCA 法（二喹啉甲酸，562 nm）由标准曲线定量蛋白：粘贴“浓度(µg/mL), A562”标准品数据与待测孔吸光度，工具做最小二乘拟合（斜率、截距、R²），反算 c = (A−b)/m，乘以稀释倍数输出 µg/mL 与 mg/mL。超范围读数标记外推；低于空白的读数判不可定量。BCA 要点：兼容约 5% 去垢剂（裂解液首选，优于 Bradford）；但 DTT/TCEP/β-巯基乙醇（>1 mM）与高浓度 EDTA 会还原/螯合 Cu²⁺ 使读数虚高，须先除干扰；工作范围约 20–2000 µg/mL（Micro BCA 0.5–20）。来源：Smith 1985 Anal Biochem。仅供教学与实验规划。
执行
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案例
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工具使用指南
BCA 法蛋白定量计算器根据标准品的浓度与 A562 吸光度进行最小二乘拟合，计算斜率、截距和 R²，再由待测吸光度反算蛋白浓度，并结合稀释倍数输出 µg/mL 与 mg/mL。工具适用于教学与实验规划，超出标准曲线范围的读数会标记为外推，低于空白的读数判为不可定量。
背景
实验获得了一组 0–2000 µg/mL 的标准品数据，以及两个裂解液样品的 A562 吸光度。
问题
需要根据标准曲线快速计算两个样品的蛋白浓度，并确认读数是否落在曲线范围内。
如何使用
在“蛋白标准品（µg/mL, A562）”中输入标准系列，在“待测吸光度（A562）”中输入 0.735 和 1.640，稀释倍数填写 1。
标准品：0, 0.000；200, 0.200；500, 0.500；1000, 1.000；2000, 2.000。待测吸光度：0.735；1.640。稀释倍数：1。结果
拟合结果为斜率 0.001、截距 0、R² = 1.00；两个样品分别为 735 µg/mL（0.735 mg/mL）和 1640 µg/mL（1.64 mg/mL），均在曲线范围内。
背景
样品检测前稀释了 5 倍，标准品数据带有约 0.03 的空白截距，样品 A562 为 0.530。
问题
需要先计算稀释检测液的浓度，再换算出原液中的蛋白浓度。
如何使用
输入标准品“0, 0.030；200, 0.230；500, 0.530；1000, 1.030”，待测吸光度输入 0.530，稀释倍数填写 5。
标准曲线拟合为 A = 0.001c + 0.03；待测吸光度：0.530；稀释倍数：5。结果
检测液浓度为 500 µg/mL，乘以 5 倍稀释后，原样品浓度为 2500 µg/mL，即 2.5 mg/mL。
每行输入一个标准品，格式为“浓度(µg/mL), A562”，例如“200, 0.200”。
每行输入一个待测孔的 A562 数值，例如 0.735 或 1.640。
填写样品在检测前的实际稀释倍数。未稀释样品填写 1，稀释 5 倍则填写 5。
工具先拟合标准曲线 A = mc + b，再按 c = (A−b)/m 反算检测液浓度，最后乘以稀释倍数得到样品浓度。
DTT、TCEP、β-巯基乙醇（>1 mM）和高浓度 EDTA 可能使读数偏高，应在检测前去除相关干扰。