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按 1:1 结合平衡从单点数据估算 Kd：当蛋白过量时结合分数 f = [P]÷([P]+Kd)，故 Kd = [P]×(1−f)÷f；f = 0.5 时 Kd 恰等于蛋白浓度。两种输入：直接输入结合分数（0–1），或由荧光各向异性 f = (r−r游离)÷(r结合−r游离) 换算。附带 ΔG° = RT·ln(Kd)（默认 25°C）。判读：<1 nM 极强、1–100 nM 强（典型转录因子/核酸酶靶点）、100 nM–1 µM 中等、>1 µM 弱（查盐浓度、poly(dI-dC) 竞争）。假设：平衡、1:1、蛋白远过量；完整滴定曲线应整体拟合。来源：Cantor & Schimmel、Heyduk & Lee 1990、Lakowicz。仅供教学与实验规划。
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案例
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工具使用指南
蛋白-DNA 结合亲和力计算器根据 1:1 平衡模型和单点数据估算解离常数 Kd，并计算 25°C（可调整温度）下的标准结合自由能 ΔG°。你可以直接输入结合分数，或根据荧光各向异性数据换算结合分数。
背景
实验显示，在 50 nM 蛋白浓度下，约一半标记 DNA 处于结合状态。
问题
需要根据单点结合分数快速估算 Kd，并查看对应的结合自由能。
如何使用
选择“结合分数（0–1）”模式，输入蛋白浓度 50 nM、结合分数 0.5 和温度 25°C。
mode=fraction；proteinConcNm=50；fractionBound=0.5；temperatureC=25；decimalPlaces=2结果
工具返回 Kd ≈ 50 nM、结合分数 0.5，以及 ΔG° ≈ −9.96 kcal/mol。
背景
游离 DNA 的各向异性为 0.12，蛋白饱和结合态为 0.25；20 nM 蛋白样品的实测各向异性为 0.18。
问题
需要将各向异性读数换算为结合分数，再估算 Kd。
如何使用
选择“荧光各向异性”模式，输入蛋白浓度 20 nM、实测 r=0.18、游离态 r=0.12、结合态 r=0.25，并设置温度为 25°C。
mode=anisotropy；proteinConcNm=20；anisotropy=0.18；anisotropyFree=0.12；anisotropyBound=0.25；temperatureC=25；decimalPlaces=2结果
工具将结合分数估算为约 0.46，Kd ≈ 23.33 nM，ΔG° ≈ −10.41 kcal/mol。
它根据单点 1:1 结合数据估算蛋白-DNA 解离常数 Kd，并计算标准结合自由能 ΔG°。
直接输入的结合分数必须严格大于 0 且小于 1。
使用 f = (r−r游离)÷(r结合−r游离)，因此需要同时输入样品、游离态和结合态各向异性。
默认温度为 25°C；该温度用于计算 ΔG°，也可以输入其他温度。
不能。该工具适用于单点估算；完整滴定曲线应对整条曲线进行拟合，并确认平衡、1:1 和蛋白过量等假设。