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按氨基酸组成计算理论等电点：对每个可解离基团用 Henderson–Hasselbalch 求净电荷（简化的 ExPASy/Bjellqvist pKa 集：N 端 7.5、K 10.0、R 12.0、H 5.98；C 端 3.55、D 4.05、E 4.45、C 9.0、Y 10.0），二分法求净电荷为零的 pH。同时给出生理 pH 7.4 净电荷、平均分子量（ProtParam 残基质量表 + 水）与酸性/碱性判读。局限：未折叠链的自由 pKa、不含翻译后修饰；所用参数集与二分算法和 Biopython IsoelectricPoint 完全一致（结果逐值相同），ExPASy 完整 Bjellqvist 表按末端残基区分 pK、可能略有差异。来源：Bjellqvist 1993、Gasteiger 2003（ExPASy）、Biopython IsoelectricPoint。仅供教学与实验规划。
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案例
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工具使用指南
蛋白质等电点计算器（pI）根据仅含 20 种标准氨基酸的单字母序列，使用简化的 ExPASy/Bjellqvist pKa 参数计算理论等电点、pH 7.4 下的净电荷、平均分子量，并判断蛋白质偏酸性或偏碱性。结果仅供教学与实验规划参考。
背景
需要根据人胰岛素 A 链序列，了解短肽的理论等电点和生理 pH 下的电荷。
问题
判断序列 GIVEQCCTSICSLYQLENYCN 的酸碱性，并估算其分子量。
如何使用
在序列框中输入 GIVEQCCTSICSLYQLENYCN，小数位数设为 2。
sequence: GIVEQCCTSICSLYQLENYCN；decimalPlaces: 2结果
得到 pI ≈ 3.79，pH 7.4 下净电荷约为 −2.54，平均分子量约为 2383.71 Da，判读为酸性。
背景
需要评估缓激肽 RPPGFSPFR 的理论电荷性质，为后续蛋白质分离实验提供参考。
问题
确认该 9 个氨基酸肽在生理 pH 下的净电荷和理论等电点。
如何使用
输入序列 RPPGFSPFR，并将小数位数设为 2。
sequence: RPPGFSPFR；decimalPlaces: 2结果
得到 pI ≈ 12.00，pH 7.4 下净电荷约为 +1.56，平均分子量约为 1060.22 Da，判读为碱性。
输入仅由 20 种标准氨基酸组成的单字母蛋白质序列。
结果包括理论 pI、pH 7.4 下的净电荷、平均分子量以及酸性或碱性判读。
可以。工具会去除 FASTA 标题、空白字符和星号后再计算。
结果基于未折叠链的自由 pKa，未考虑蛋白质结构环境和翻译后修饰，因此属于理论估算。
所用简化参数和算法与 Biopython IsoelectricPoint 一致；ExPASy 完整参数会区分末端残基，结果可能略有差异。