Calculateur de pureté des acides nucléiques (OD260/280) | Outil en ligne gratuit | Elysia Tools
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Calculateur de pureté des acides nucléiques (OD260/280)
Évalue la pureté d'un acide nucléique par le ratio OD260/280 : les bases absorbent au maximum à 260 nm et les acides aminés aromatiques (ainsi que le phénol) vers 280 nm — A260/A280 diagnostique donc un entraînement de protéines/phénol. Valeurs attendues : ADN pur ≈ 1.8 (fenêtre 1.7–2.0), ARN pur ≈ 2.0 (fenêtre 1.8–2.2) ; ADN < 1.7 ou ARN < 1.8 signale une contamination protéines/phénol/guanidinium, ADN > 2.0 suggère une contamination par l'ARN, ARN > 2.2 un artefact de mesure (faible force ionique). Champ A230 optionnel pour le ratio secondaire A260/A230 (pur 2.0–2.2 ; plus bas = guanidinium/phénol/glucides/sels). Sous ~0.05 de lecture le ratio n'est pas fiable. Sources : Manchester 1995, Sambrook & Russell, Thermo Fisher T042. Uniquement pour l'éducation.
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Points clés
Catégorie
Education
Types d’entrée
select, number
Type de sortie
json
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4
API disponible
Oui
Aperçu
Ce calculateur estime la pureté d’un échantillon d’ADN ou d’ARN à partir des absorbances A260 et A280, puis compare le ratio OD260/280 aux valeurs attendues. Une absorbance A230 facultative permet aussi d’évaluer le ratio secondaire A260/A230. Outil destiné à l’éducation.
Quand l’utiliser
Vérifier rapidement la pureté d’une préparation d’ADN ou d’ARN après une mesure spectrophotométrique.
Rechercher une contamination probable par des protéines, du phénol, du guanidinium ou des sels.
Comparer un échantillon aux fenêtres attendues avant une étape expérimentale, comme une digestion ou une RT-qPCR.
Fonctionnement
1Sélectionnez le type d’acide nucléique : ADN ou ARN.
2Saisissez les absorbances A260 et A280 mesurées sur le même échantillon.
3Ajoutez éventuellement A230 pour calculer le ratio secondaire A260/A230.
4Le calculateur divise A260 par A280, arrondit le résultat selon le nombre de décimales choisi et fournit une interprétation.
Cas d’usage
Contrôle de pureté d’un plasmide d’ADN avant digestion ou séquençage.
Évaluation d’un extrait d’ARN après une extraction au TRIzol ou sur colonne.
Interprétation pédagogique de mesures obtenues avec un spectrophotomètre ou un appareil de type NanoDrop.
Exemples
1. Préparation d’ADN avec un ratio proche de 1,8
Étudiant en biologie moléculaire
Contexte
Un échantillon de plasmide présente une absorbance A260 de 0,45 et une absorbance A280 de 0,25.
Problème
Vérifier si le ratio indique une préparation d’ADN compatible avec la valeur attendue.
Utilisation
Sélectionner « ADN », saisir A260 = 0,45 et A280 = 0,25, puis ajouter A230 = 0,20.
Le ratio OD260/280 est de 1,80, dans la fenêtre attendue pour l’ADN. Le ratio A260/A230 est de 2,25, ce qui n’indique pas de résidus organiques ou salins importants.
2. Préparation d’ARN avec contamination probable
Chercheuse en biologie moléculaire
Contexte
Un extrait d’ARN mesuré après extraction présente A260 = 0,60, A280 = 0,36 et A230 = 0,90.
Problème
Déterminer si les ratios sont compatibles avec un ARN suffisamment pur pour une RT-qPCR.
Utilisation
Sélectionner « ARN », saisir les trois absorbances et choisir quatre décimales.
FAQ
Quelle valeur de ratio OD260/280 est attendue pour l’ADN ?
L’ADN pur présente généralement un ratio proche de 1,8, avec une fenêtre indicative de 1,7 à 2,0.
Quelle valeur de ratio OD260/280 est attendue pour l’ARN ?
L’ARN pur présente généralement un ratio proche de 2,0, avec une fenêtre indicative de 1,8 à 2,2.
À quoi sert la mesure A230 ?
A230 permet de calculer A260/A230. Un ratio inférieur à environ 2,0–2,2 peut indiquer des résidus de guanidinium, phénol, glucides ou sels.
Que signifie un ratio faible ?
Un ratio faible peut signaler une contamination par des protéines, du phénol ou du guanidinium, selon le type d’acide nucléique.
Le ratio est-il fiable pour une absorbance très faible ?
Sous une lecture d’environ 0,05, le ratio est considéré comme peu fiable.
Le ratio OD260/280 est de 1,6667, inférieur à la fenêtre attendue de l’ARN. Le ratio A260/A230 est de 0,6667, compatible avec un entraînement de guanidinium, phénol ou sels ; une repurification doit être envisagée.