Bewertet die Reinheit von Nukleinsäure-Präparaten über das OD260/280-Verhältnis: Basen absorbieren maximal bei 260 nm, aromatische Aminosäuren von Protein (und Phenol) nahe 280 nm — A260/A280 diagnostiziert also Protein-/Phenolverschleppung. Erwartungswerte: reine DNA ≈ 1.8 (Fenster 1.7–2.0), reine RNA ≈ 2.0 (Fenster 1.8–2.2); DNA < 1.7 oder RNA < 1.8 bedeutet Protein-/Phenol-/Guanidin-Kontamination, DNA > 2.0 deutet auf RNA-Kontamination, RNA > 2.2 auf einen Messartefakt (niedrige Ionenstärke). Optionales A230 für das Sekundärverhältnis A260/A230 (rein 2.0–2.2; darunter Guanidin/Phenol/Kohlenhydrate/Salze). Unter ~0.05 Messwert ist das Verhältnis unzuverlässig. Quellen: Manchester 1995, Sambrook & Russell, Thermo Fisher T042. Nur für Ausbildung.
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Wichtige Fakten
Kategorie
Education
Eingabetypen
select, number
Ausgabetyp
json
Sample-Abdeckung
4
API bereit
Ja
Überblick
Der Nukleinsäure-Reinheitsrechner bewertet DNA- oder RNA-Proben anhand des Verhältnisses A260/A280. Optional berechnet er auch A260/A230, um Hinweise auf Phenol-, Guanidin-, Salz- oder andere Rückstände zu erkennen. Das Ergebnis dient ausschließlich der Ausbildung und Laborplanung.
Wann verwenden
Wenn du die Reinheit einer DNA-Präparation anhand von A260 und A280 einschätzen möchtest.
Wenn du eine RNA-Probe vor nachfolgenden Laborschritten auf Protein- oder Phenolverschleppung prüfen willst.
Wenn zusätzlich A230 vorliegt und du das Verhältnis A260/A230 auf mögliche Guanidin-, Salz- oder Phenolrückstände prüfen möchtest.
So funktioniert es
1Wähle aus, ob die Probe DNA oder RNA ist.
2Gib die Absorptionen A260 und A280 derselben verdünnten Probe ein.
3Der Rechner teilt A260 durch A280 und vergleicht das Ergebnis mit dem passenden Erwartungsfenster: 1,7–2,0 für DNA oder 1,8–2,2 für RNA.
4Optional berechnet er aus A260 und A230 das Sekundärverhältnis A260/A230 und gibt die Ergebnisse als JSON aus.
Anwendungsfälle
Ausbildung in Molekularbiologie: A260/A280-Verhältnisse von DNA- und RNA-Proben berechnen und interpretieren.
Qualitätskontrolle von Plasmid-DNA vor Restriktion oder Sequenzierung.
Prüfung von RNA-Extrakten vor RT-qPCR anhand von A260/A280 und optional A260/A230.
Beispiele
1. Reine Plasmid-DNA mit passendem A260/A280-Verhältnis
Studentin im Molekularbiologiepraktikum
Hintergrund
Eine Plasmidpräparation wurde photometrisch gemessen. Die Probe zeigt A260 = 0,45 und A280 = 0,25.
Aufgabe
Vor einem Ausbildungsexperiment soll geprüft werden, ob das Verhältnis zur erwarteten Reinheit von DNA passt.
Verwendung
DNA auswählen, A260 mit 0,45 und A280 mit 0,25 eingeben. Zusätzlich A230 mit 0,20 eintragen und zwei Dezimalstellen wählen.
Das Ergebnis lautet A260/A280 = 1,80 und liegt im DNA-Fenster von 1,7–2,0. Das zusätzliche Verhältnis A260/A230 = 2,25 weist nicht auf organische oder Salzrückstände hin.
2. RNA-Probe mit Hinweis auf Kontamination
Mitarbeiter in einem RNA-Praktikum
Hintergrund
Eine RNA-Probe aus einer TRIzol-Aufarbeitung wurde mit A260 = 0,60, A280 = 0,36 und A230 = 0,90 gemessen.
Aufgabe
Vor der weiteren Verwendung soll geklärt werden, ob die Probe das erwartete RNA-Reinheitsfenster erreicht.
Verwendung
FAQ
Welches A260/A280-Verhältnis gilt als rein?
Für DNA liegt der erwartete Bereich bei etwa 1,8, für RNA bei etwa 2,0. Die akzeptablen Fenster sind 1,7–2,0 für DNA und 1,8–2,2 für RNA.
Was bedeutet ein niedriges A260/A280-Verhältnis?
Ein Wert unter 1,7 bei DNA oder unter 1,8 bei RNA weist auf mögliche Protein-, Phenol- oder Guanidinkontamination hin.
Was bedeutet ein hohes A260/A280-Verhältnis?
Bei DNA kann ein Wert über 2,0 auf RNA-Kontamination hindeuten. Bei RNA kann ein Wert über 2,2 ein Messartefakt, etwa durch niedrige Ionenstärke, anzeigen.
Wofür wird A230 verwendet?
A230 ermöglicht die zusätzliche Berechnung von A260/A230. Reine Proben liegen typischerweise bei 2,0–2,2; niedrigere Werte können auf Guanidin, Phenol, Kohlenhydrate oder Salze hinweisen.
Sind sehr niedrige Absorptionswerte zuverlässig?
Unter einem Messwert von etwa 0,05 ist das Verhältnis unzuverlässig. Die Ergebnisse sollten daher vorsichtig interpretiert werden.
A260/A280 = 1,6667 liegt unter dem RNA-Fenster von 1,8–2,2 und deutet auf mögliche Protein- oder Phenolverschleppung hin. A260/A230 = 0,6667 spricht zusätzlich für Guanidin-, Phenol- oder Salzrückstände.