Bestimmt die DNA-Konzentration über die UV-Absorption bei 260 nm: Konzentration (µg/mL) = A260 × Verdünnungsfaktor × Konstante ÷ Schichtdicke (cm). Konstanten: doppelsträngige DNA 1 OD = 50 µg/mL, einzelsträngige DNA 1 OD = 33 µg/mL (RNA 40 — siehe RNA-Tool). 1 µg/mL = 1 ng/µL; mit Elutionsvolumen ergibt sich die Gesamtausbeute in µg. Enthält das lineare Fenster 0.1–1.5: unter 0.1 dominiert Rauschen, über 1.5 kann der Detektor sättigen. Reinheit über OD260/280 beurteilen. Quellen: Marmur & Doty 1961/1962, Sambrook & Russell, Thermo Fisher NanoDrop. Nur für Ausbildung und Versuchsplanung.
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Wichtige Fakten
Kategorie
Education
Eingabetypen
number, select
Ausgabetyp
json
Sample-Abdeckung
4
API bereit
Ja
Überblick
Der DNA-Konzentrationsrechner bestimmt die DNA-Konzentration aus der A260-Absorption, dem DNA-Typ, dem Verdünnungsfaktor und der Schichtdicke. Er gibt die Werte in µg/mL und ng/µL aus und berechnet optional die Gesamtausbeute aus dem Elutionsvolumen.
Wann verwenden
Wenn die DNA-Konzentration einer verdünnten Probe aus einem A260-Messwert berechnet werden soll.
Wenn dsDNA und ssDNA mit der passenden Umrechnungskonstante ausgewertet werden sollen.
Wenn zusätzlich zur Konzentration die gesamte DNA-Menge eines Eluats bestimmt werden soll.
So funktioniert es
1Geben Sie die A260-Absorption der gegen den Elutionspuffer blankierten Probe ein.
2Wählen Sie zwischen doppelsträngiger DNA mit 50 µg/mL pro OD und einzelsträngiger DNA mit 33 µg/mL pro OD.
3Tragen Sie Verdünnungsfaktor und Schichtdicke ein. Das Tool berechnet nach der Formel A260 × Verdünnungsfaktor × Konstante ÷ Schichtdicke.
4Optional können Sie das Elutionsvolumen eingeben, um die Gesamtausbeute in µg zu erhalten. Zusätzlich wird der Messwert im linearen Bereich von 0,1 bis 1,5 eingeordnet.
Anwendungsfälle
Konzentrationsbestimmung von DNA-Eluaten nach einer Plasmid-Miniprep.
Vergleich der Ausbeute von dsDNA- und ssDNA-Proben anhand von A260-Messungen.
Versuchsplanung mit Konzentration, ng/µL und optionaler Gesamtmenge eines Eluats.
Beispiele
1. Plasmid-Miniprep mit verdünnter dsDNA
Laborpraktikant
Hintergrund
Eine 1:10 verdünnte Plasmidprobe zeigt in einer Standardküvette mit 1 cm Schichtdicke eine A260-Absorption von 0,25. Das Elutionsvolumen beträgt 100 µL.
Aufgabe
Die DNA-Konzentration und die Gesamtausbeute sollen aus dem Messwert berechnet werden.
Verwendung
A260 = 0,25, DNA-Typ = doppelsträngige DNA, Verdünnungsfaktor = 10, Schichtdicke = 1 cm und Probenvolumen = 100 µL eingeben.
Der Rechner gibt 59,4 µg/mL beziehungsweise 59,4 ng/µL aus und markiert den Wert als oberhalb des linearen Bereichs. Die Probe sollte verdünnt und erneut gemessen werden.