Bewertet Salz- und organische Lösungsmittelkontamination über das OD260/230-Verhältnis — die Kontrolle, die sieht, was 260/280 verpasst: reine Nukleinsäure liefert 2.0–2.2, Werte darunter signalisieren Guanidinium-Verschleppung (TRIzol/Säulen-Kits), Phenol, Kohlenhydrate, EDTA, hohe Salze oder β-Mercaptoethanol; 2.2–2.3 ist meist ein akzeptabler Puffereffekt; über 2.3 deutet auf ein Wasser-/Pufferartefakt hin — nachmessen. Optionales A280 für den OD260/280-Kreuzcheck (DNA ~1.8, RNA ~2.0): eine Messreihe deckt beide Reinheitsdimensionen ab. Unter ~0.05 Messwert ist das Verhältnis unzuverlässig. Quellen: Thermo Fisher T042, Sambrook & Russell, Manchester 1995. Nur für Ausbildung.
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Wichtige Fakten
Kategorie
Education
Eingabetypen
select, number
Ausgabetyp
json
Sample-Abdeckung
4
API bereit
Ja
Überblick
Der OD260/230-Reinheitsrechner bewertet Salz- und Lösungsmittelrückstände in DNA- oder RNA-Proben anhand der Absorption bei 260 und 230 nm. Optional lässt sich mit A280 zusätzlich das OD260/280-Verhältnis prüfen. Die Ergebnisse dienen ausschließlich der Ausbildung.
Wann verwenden
Wenn nach einer TRIzol- oder Säulenreinigung Guanidinium-, Phenol- oder Salzreste vermutet werden.
Wenn der OD260/280-Wert allein keine ausreichende Einschätzung der Nukleinsäure-Reinheit ermöglicht.
Wenn A260-, A230- und optional A280-Messwerte aus derselben Probe schnell eingeordnet werden sollen.
So funktioniert es
1Wählen Sie den Nukleinsäuretyp DNA oder RNA und geben Sie die A260- sowie A230-Absorption ein.
2Der Rechner berechnet das Verhältnis OD260/230 aus A260 geteilt durch A230.
3Optional können Sie A280 angeben, um zusätzlich das OD260/280-Verhältnis zu erhalten.
4Das Ergebnis ordnet den Wert ein: 2,0–2,2 gilt als sauberer Bereich, Werte unter 2,0 weisen auf mögliche Kontamination hin; Werte über 2,3 sollten nachgemessen werden.
Anwendungsfälle
Kontrolle von DNA nach einer Säulenreinigung auf Guanidinium- oder Salzverschleppung.
Bewertung von RNA nach einer TRIzol-Aufreinigung vor nachfolgenden Analysen.
Kombinierte Reinheitsprüfung mit OD260/230 und optionalem OD260/280-Kreuzcheck.
Beispiele
1. Saubere Plasmid-DNA nach Säulenreinigung
Molekularbiologe
Hintergrund
Eine säulengereinigte Plasmidprobe soll vor der weiteren Verwendung auf Salz- und Lösungsmittelrückstände geprüft werden.
Aufgabe
A260, A230 und A280 sollen gemeinsam auf zwei Reinheitsdimensionen geprüft werden.
Verwendung
Wählen Sie DNA und geben Sie A260 = 0,5, A230 = 0,25 sowie A280 = 0,278 ein.
Nukleinsäuretyp: DNA; Dezimalstellen: 2
Ergebnis
OD260/230 = 2,00 liegt am unteren Rand des sauberen Bereichs. Der OD260/280-Kreuzcheck ergibt 1,80 und entspricht dem erwarteten Wert für reine DNA.
2. TRIzol-RNA mit möglicher Guanidinium- und Phenolkontamination
RNA-Laborant
Hintergrund
Eine mit TRIzol isolierte RNA-Probe zeigt eine ungewöhnlich hohe Absorption bei 230 nm.
Aufgabe
Die Probe soll auf organische Lösungsmittel- oder Salzrückstände geprüft werden, bevor sie weiterverwendet wird.
Verwendung
Wählen Sie RNA und geben Sie A260 = 0,60, A230 = 1,20 sowie A280 = 0,36 ein.
FAQ
Was bedeutet das OD260/230-Verhältnis?
Es beschreibt das Verhältnis der Absorption bei 260 nm zu der bei 230 nm und ergänzt die Reinheitsprüfung über OD260/280.
Welcher OD260/230-Wert gilt als gut?
Für reine Nukleinsäure liegt der Wert typischerweise bei 2,0–2,2.
Was bedeutet ein OD260/230-Wert unter 2,0?
Ein niedriger Wert kann auf Guanidinium-, Phenol-, Salz-, EDTA-, Kohlenhydrat- oder β-Mercaptoethanol-Rückstände hinweisen.
Kann ich das OD260/280-Verhältnis ebenfalls berechnen?
Ja. Geben Sie dafür optional A280 an. Erwartungswerte liegen ungefähr bei 1,8 für DNA und 2,0 für RNA.
Wann ist das Verhältnis unzuverlässig?
Bei Absorptionsmesswerten unter etwa 0,05 ist das berechnete Verhältnis unzuverlässig.
OD260/230 = 0,500 liegt deutlich unter 2,0 und weist auf mögliche Guanidinium-, Phenol- oder Salzverschleppung hin. Der OD260/280-Wert beträgt 1,667 und liegt ebenfalls unter dem erwarteten RNA-Bereich.