Ligations-Molverhältnisrechner (Insert:Vektor)

Ligations-Molverhältnisrechner (Insert:Vektor) | Kostenloses Online-Tool | Elysia Tools

Leitfaden zur Tool-Nutzung

Erfahren Sie, wann dieses Tool passt, was es unterstützt und wie Nutzer es anwenden.

Wichtige Fakten

Kategorie: Education
Eingabetypen: select, number
Ausgabetyp: json
Sample-Abdeckung: 4
API bereit: Ja

Überblick

Der Ligations-Molverhältnisrechner bestimmt die benötigte Insertmasse für ein gewünschtes Insert:Vektor-Verhältnis oder prüft das tatsächliche Verhältnis aus zwei DNA-Massen. Zusätzlich berechnet er bei Angabe des Reaktionsvolumens die pmol- und nM-Werte und ordnet das Ergebnis anhand der Insertgröße ein.

Wann verwenden

Wenn du die passende Insertmasse für ein definiertes molares Verhältnis zur Vektormasse berechnen möchtest.
Wenn du vor einer Ligation prüfen willst, welchem tatsächlichen Insert:Vektor-Verhältnis zwei DNA-Massen entsprechen.
Wenn du bei bekanntem Reaktionsvolumen die DNA-Mengen zusätzlich als pmol und nM bewerten möchtest.

So funktioniert es

1Wähle zwischen „Insertmasse berechnen“ und „Tatsächliches Verhältnis prüfen“.
2Gib Vektorgröße, Vektormasse und Insertgröße ein; im Prüfmodus ergänzt du die Insertmasse, im Berechnungsmodus das gewünschte Verhältnis.
3Die Insertmasse wird mit Insert_ng = Verhältnis × Vektor_ng × (Insert_bp ÷ Vektor_bp) berechnet oder das reale Molverhältnis aus beiden Massen bestimmt.
4Optional berechnet der Rechner bei einem Reaktionsvolumen die pmol- und nM-Konzentrationen und vergleicht das Verhältnis mit dem empfohlenen Bereich.

Anwendungsfälle

Klonierungsansätze mit definiertem Insert:Vektor-Molverhältnis planen.
Vorhandene DNA-Mengen auf ein geeignetes Verhältnis für die Ligation prüfen.
pmol- und nM-Werte eines geplanten Ansatzes für die Reaktionsplanung berechnen.

Beispiele

1. 3:1-Ligation mit 3-kb-Vektor und 1-kb-Insert

Molekularbiologin

Hintergrund

Für einen Klonierungsansatz stehen 100 ng eines 3000-bp-Vektors zur Verfügung. Das 1000-bp-Insert soll im Verhältnis 3:1 eingesetzt werden.

Aufgabe

Die erforderliche Insertmasse und die Konzentrationen in einem 20-µL-Ansatz sollen bestimmt werden.

Verwendung

Wähle „Insertmasse berechnen“, gib 3000 bp, 100 ng, 1000 bp und das Verhältnis 3 ein. Trage anschließend 20 µL als Reaktionsvolumen ein.

Modus: Insertmasse berechnen; Vektorgröße: 3000 bp; Vektormasse: 100 ng; Insertgröße: 1000 bp; Verhältnis: 3:1; Reaktionsvolumen: 20 µL.

Ergebnis

Benötigt werden 100 ng Insert und 100 ng Vektor. Das entspricht 0,154 pmol Insert und 0,051 pmol Vektor; in 20 µL ergeben sich 7,692 nM Insert und 2,564 nM Vektor.

2. Tatsächliches Verhältnis eines 750-bp-Inserts prüfen

Laborpraktikant

Hintergrund

Vor der Ligation liegen 200 ng eines 4000-bp-Vektors und 30 ng eines 750-bp-Inserts vor.

Aufgabe

Es soll geprüft werden, ob die vorhandenen Massen im empfohlenen Bereich für ein 750-bp-Insert liegen.

FAQ

Welche Eingaben benötigt der Rechner?

Er benötigt Vektorgröße, Vektormasse und Insertgröße. Je nach Modus kommen gewünschtes Verhältnis oder Insertmasse hinzu.

Wann wird die Insertmasse berechnet?

Im Modus „Insertmasse berechnen (Zielverhältnis)“ aus Verhältnis, Vektormasse sowie Insert- und Vektorgröße.

Wann sollte ich den Prüfmodus verwenden?

Verwende ihn, wenn beide DNA-Massen bereits feststehen und du das tatsächliche Insert:Vektor-Molverhältnis bestimmen möchtest.

Welche Verhältnisbereiche werden empfohlen?

Für Inserts unter 200 bp gelten 5–10:1, für 200–999 bp 3–5:1 und ab 1000 bp 1–5:1 als empfohlene Bereiche.

Was bewirkt die Eingabe des Reaktionsvolumens?

Bei einem Reaktionsvolumen größer als 0 berechnet der Rechner zusätzlich die Konzentrationen von Vektor und Insert in nM.

Modus: Tatsächliches Verhältnis prüfen; Vektorgröße: 4000 bp; Vektormasse: 200 ng; Insertgröße: 750 bp; Insertmasse: 30 ng; Reaktionsvolumen: 0 µL.

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Wann verwenden

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Beispiele

1. 3:1-Ligation mit 3-kb-Vektor und 1-kb-Insert

2. Tatsächliches Verhältnis eines 750-bp-Inserts prüfen

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