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Calculadora de proporción molar de ligadura (inserto:vector)
Configura ligaduras según NEB: pmol = ng × 10³ ÷ (650 × bp). El modo de cálculo de masa usa la fórmula clásica inserto_ng = proporción × vector_ng × (bp_inserto ÷ bp_vector) (el factor 650 se cancela); el modo de verificación entra ambas masas y devuelve la proporción molar real. Intervalos recomendados según el tamaño del inserto: <200 bp 5–10:1, 200–999 bp 3–5:1, ≥1000 bp 1–5:1, avisando de que proporciones >10:1 favorecen concámeros del inserto. Con el volumen de reacción se obtienen las concentraciones nM (la ligasa es sensible a la concentración de extremos, >1 nM es más eficiente). Fuentes: NEB NEBioCalculator y guía de ligadura, Promega BioMath, Sambrook & Russell. Solo para educación.
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Guía de uso de la herramienta
Conoce cuándo usar esta herramienta, qué admite y cómo la aplican los usuarios.
Datos clave
Categoría
Education
Tipos de entrada
select, number
Tipo de salida
json
Cobertura de ejemplos
4
API disponible
Sí
Resumen
La calculadora de proporción molar de ligadura inserto:vector estima la masa de inserto necesaria para una proporción deseada o verifica la proporción real a partir de ambas masas. También calcula pmol y, si introduces el volumen de reacción, las concentraciones en nM.
Cuándo usarlo
Para calcular cuántos ng de inserto necesitas con una proporción molar inserto:vector concreta.
Para comprobar si las masas de ADN preparadas alcanzan la proporción recomendada según el tamaño del inserto.
Para estimar los pmol y las concentraciones nM de vector e inserto en un volumen de reacción.
Cómo funciona
1Selecciona «Calcular masa del inserto» o «Verificar proporción real».
2Introduce el tamaño del vector y del inserto en pares de bases, además de las masas requeridas.
3En el modo de cálculo, indica la proporción inserto:vector deseada; en el modo de verificación, introduce también la masa real del inserto.
4Añade opcionalmente el volumen de reacción para obtener las concentraciones nM y consulta la banda recomendada.
Casos de uso
Planificar una ligadura de clonación ajustando la masa del inserto al tamaño y la masa del vector.
Revisar una mezcla preparada antes de la reacción y detectar una proporción molar inferior a la recomendada.
Comparar la cantidad de ADN y la concentración de extremos aproximada en distintos volúmenes de reacción.
Ejemplos
1. Montaje 3:1 con vector de 3 kb e inserto de 1 kb
Investigador de clonación molecular
Contexto
Se dispone de un vector linealizado de 3000 bp con una masa de 100 ng y se busca una proporción molar inserto:vector de 3:1.
Problema
Calcular la masa de un inserto de 1000 bp y estimar los pmol y las concentraciones en una reacción de 20 µL.
Cómo usarlo
Selecciona «Calcular masa del inserto», introduce 3000 bp, 100 ng, 1000 bp y una proporción de 3. Añade 20 µL como volumen de reacción.
Se requieren 100 ng de inserto para una proporción 3:1. El resultado es aproximadamente 0.051 pmol de vector y 0.154 pmol de inserto; en 20 µL, 2.564 nM y 7.692 nM, respectivamente.
2. Verificación de una proporción baja con un inserto de 750 bp
Técnico de laboratorio
Contexto
La mezcla contiene 200 ng de un vector de 4000 bp y 30 ng de un inserto de 750 bp.
Problema
Comprobar la proporción real y determinar si se encuentra dentro del intervalo recomendado para ese inserto.
Preguntas frecuentes
¿Qué fórmula usa la calculadora para la masa del inserto?
Usa inserto_ng = proporción × vector_ng × (bp del inserto ÷ bp del vector).
¿Qué proporción molar se recomienda?
Para insertos menores de 200 bp, 5–10:1; de 200 a 999 bp, 3–5:1; y de 1000 bp o más, 1–5:1.
¿Qué ocurre si introduzco un volumen de reacción igual a 0?
La calculadora omite las concentraciones nM y muestra los demás resultados.
¿Qué resultados devuelve la calculadora?
Devuelve la masa calculada o la proporción real, los pmol de vector e inserto y, si se indica el volumen, sus concentraciones nM.
¿Una proporción superior a 10:1 es siempre mejor?
No. El exceso de inserto puede favorecer la formación de concatémeros del inserto.
La proporción real es aproximadamente 0.8:1, por debajo del intervalo recomendado de 3–5:1 para un inserto de 750 bp. Para alcanzar 3:1, la masa calculada del inserto sería 112.5 ng.