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估算限制酶消化后的片段大小：环状底物 n 个切点产生 n 个片段（绕原点环绕），线性底物 n 个切点产生 n+1 个片段。切点位置模式按逗号分隔的坐标精确计算各片段；切点数目模式按平均分布给出片段数与均值。附带随机 DNA 识别位点频率：4 碱基识别子约每 256 bp 一个、6 碱基约每 4096 bp 一个（REBASE/Sambrook），以及琼脂糖凝胶分辨率提示（<50 bp 可能跑丢）。来源：Sambrook & Russell 第 3 版、REBASE。仅供教学与实验规划。
执行
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案例
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工具使用指南
限制酶切片段长度计算器可根据底物拓扑、底物长度和切点信息，估算环状质粒或线性 DNA 消化后的片段数量、各片段长度、平均长度及总长度。支持按逗号分隔的切点坐标精确计算，也支持按切点数目进行平均估算，仅供教学与实验规划参考。
背景
环状 pUC19 长度为 2686 bp，两个限制酶分别在 1000 bp 和 2000 bp 处切割。
问题
需要确认双酶切后是否产生两个预期片段，以及片段长度是否与质粒总长度一致。
如何使用
选择“环状质粒”和“切点位置（精确片段）”，输入底物长度 2686，并填写切点 `1000, 2000`。
{"topology":"circular","inputMode":"positions","substrateLengthBp":2686,"cutPositions":"1000, 2000","decimalPlaces":2}结果
得到 2 个片段：1000 bp 和 1686 bp；平均长度为 1343 bp，片段总长度为 2686 bp。
背景
一段 5000 bp 的线性 PCR 产物在 1500 bp 和 3000 bp 位置包含限制性切点。
问题
需要计算两次切割后产生的端部片段和中间片段。
如何使用
选择“线性 DNA”和“切点位置（精确片段）”，输入底物长度 5000，并填写 `1500, 3000`。
{"topology":"linear","inputMode":"positions","substrateLengthBp":5000,"cutPositions":"1500, 3000","decimalPlaces":2}结果
得到 3 个片段：1500 bp、1500 bp 和 2000 bp；平均长度为 1666.67 bp，总长度为 5000 bp。
环状底物有 n 个切点产生 n 个片段；线性底物有 n 个切点产生 n+1 个片段。
在位置模式下输入从第 1 个碱基计数的坐标，并使用逗号分隔，例如 `1000, 2000`。
位置模式按实际坐标计算每个片段；切点数目模式按平均分布估算片段数量和平均长度。
所有片段长度之和应等于输入的底物长度，表示 DNA 总长度保持不变。
小于 50 bp 的片段可能在电泳过程中跑出或难以分辨，应结合凝胶条件谨慎判断。
背景
教学中需要估算一段 6000 bp 线性 DNA 被 3 个切点消化后的平均片段大小，但暂时没有具体坐标。
问题
需要先获得片段数量和平均长度的理论估算值。
如何使用
选择“线性 DNA”和“切点数目（平均估算）”，输入底物长度 6000 bp 和切点数目 3。
{"topology":"linear","inputMode":"count","substrateLengthBp":6000,"cutSiteCount":3,"decimalPlaces":2}结果
线性 DNA 的 3 个切点预计产生 4 个片段，平均长度为 1500 bp；实际片段长度仍取决于切点的真实分布。