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两条经典 Tm 估算式：Wallace 规则 Tm = 2×(A+T) + 4×(G+C)（<14 nt 短链，不含盐依赖）；盐校正公式 Tm = 81.5 + 16.6×log₁₀[Na⁺] + 0.41×(%G+C) − 600/n（Sambrook 1989 p.11.46，Primer3 同式；长度项各文献为 500–675/n）。自动模式按长度切换。输出 GC%、碱基组成与两种方法结果对照。两者均为近似——设计级精度请用最近邻热力学（见配套 pcr-primer-tm 工具）。假设：DNA、无错配、无甲酰胺/DMSO、[Na⁺] 0.01–1 M。来源：Wallace 1979、von Ahsen 2001、Sambrook & Maniatis、OligoCalc。仅供教学与实验规划。
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案例
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工具使用指南
寡核苷酸 Tm 计算器根据 DNA 序列、计算方法和钠离子浓度，估算寡核苷酸的解链温度，并输出长度、GC 含量、碱基组成、Wallace 规则结果及盐校正结果。计算结果仅供教学和实验规划参考。
背景
实验人员需要在 50 mM 钠离子缓冲条件下快速估算一条 20 nt DNA 寡核苷酸的解链温度。
问题
确认中等长度、50% GC 序列在指定盐浓度下的近似 Tm，并与 Wallace 规则结果比较。
如何使用
输入 `ATGCATGCATGCATGCATGC`，选择“自动（按长度）”，将钠离子浓度设为 50 mM。
method：自动；sodiumMm：50；decimalPlaces：2结果
序列长度为 20 nt、GC 含量为 50%；自动模式使用盐校正公式，Tm 约为 50.4 °C，Wallace 规则结果为 60 °C。
背景
学生需要估算一条 10 nt 短 DNA 探针的 Tm，并了解自动模式对短序列的公式选择。
问题
判断短于 14 nt 的序列是否会自动采用 Wallace 规则。
如何使用
输入 `ACGTACGTAC`，选择“自动（按长度）”，钠离子浓度设为 50 mM。
method：自动；sodiumMm：50；decimalPlaces：2结果
序列长度为 10 nt、GC 含量为 60%；自动模式使用 Wallace 规则，Tm 约为 32 °C，并同时显示盐校正公式的近似结果 20.4 °C。
支持仅包含 A、C、G、T 的 DNA 序列，长度为 4–200 nt。
长度小于 14 nt 时使用 Wallace 规则，长度为 14 nt 及以上时使用盐校正公式。
钠离子浓度用于盐校正公式；Wallace 规则不包含盐浓度项。
不适合直接作为设计级精度依据。两种方法都是近似估算，精确设计应使用最近邻热力学模型。
计算假设为 DNA、无错配、无甲酰胺或 DMSO，且钠离子浓度在 0.01–1 M 范围内。