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按 Pace 1995 / Gill & von Hippel 1989 公式计算 ε280 = 5500×nTrp + 1490×nTyr + 125×n胱氨酸（M⁻¹cm⁻¹，典型误差 ±5%）。胱氨酸为二硫键配对的 Cys，仅氧化态计入（⌊Cys/2⌋，落单不计），工具同时给出全还原与全氧化两个值以便夹逼实际氧化态。序列模式自动计数 W/Y/C 并用 ProtParam 平均残基质量算分子量；计数模式直接输入残基数目与可选分子量。附带 A0.1% = ε/MW（1 mg/mL 的吸光度），即由 A280 反推浓度 c = A/ε。注意：不含 Trp/Tyr 的蛋白 ε280 近乎为零（改用 A205 或 BCA）；需扣除核酸污染（A260）。来源：Pace 1995、Gill & von Hippel 1989、ExPASy ProtParam。仅供教学与实验规划。
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案例
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工具使用指南
蛋白质消光系数计算器（ε280）根据蛋白质序列或 Trp、Tyr、Cys 残基数，按 Pace 1995 与 Gill & von Hippel 公式计算摩尔消光系数，并同时给出全还原、全氧化范围、分子量和 A0.1% 等结果，适用于教学与实验规划。
背景
胰岛素 A 链序列为 GIVEQCCTSICSLYQLENYCN，需要估算其紫外吸收特性。
问题
序列含 2 个 Tyr、4 个 Cys 且不含 Trp，需要比较 Cys 全还原和全氧化时的 ε280。
如何使用
选择“蛋白质序列”模式，输入 GIVEQCCTSICSLYQLENYCN，并将半胱氨酸状态设为“全部还原”。
序列：GIVEQCCTSICSLYQLENYCN；半胱氨酸状态：全部还原；小数位数：2。结果
全还原 ε280 为 2980 M⁻¹cm⁻¹；4 个 Cys 全部氧化形成 2 个胱氨酸时，ε280 上限为 3230 M⁻¹cm⁻¹。序列模式还可估算该链的分子量，并给出 A0.1% 约 1.25。
背景
一款 42 kDa 酶含 3 个 Trp、6 个 Tyr 和 4 个 Cys，假设 Cys 全部形成二硫键。
问题
需要快速获得全氧化状态的摩尔消光系数，并估算 1 mg/mL 溶液的 A280。
如何使用
选择“残基数目”模式，输入 Trp 为 3、Tyr 为 6、Cys 为 4，选择“全部氧化”，并输入分子量 42 kDa。
Trp：3；Tyr：6；Cys：4；半胱氨酸状态：全部氧化；分子量：42 kDa；小数位数：4。结果
ε280 为 25690 M⁻¹cm⁻¹，全还原值为 25440 M⁻¹cm⁻¹；A0.1% 为 0.6117。
请输入标准单字母氨基酸编码。FASTA 标题、空格、换行和星号会被去除。
只有形成二硫键的 Cys 对计入，每个胱氨酸贡献 125 M⁻¹cm⁻¹；落单的 Cys 不计入。
全还原时 Cys 不贡献 ε280；全氧化时按 Cys 数量的一半估算胱氨酸贡献，用于限定实际氧化态范围。
A0.1% 是 1 mg/mL 蛋白溶液在 1 cm 光程下的理论吸光度，按 ε/MW 计算。
不适合。不含 Trp/Tyr 的蛋白 ε280 近乎为零，可考虑 A205 或 BCA，并注意校正核酸污染造成的 A260 影响。