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Coeficiente de Extinção Molar e Lei de Beer-Lambert (A = ε·c·l)

· Última atualização：2026-08-22

Resolve qualquer uma das quatro grandezas da lei de Beer-Lambert A = ε·c·l a partir das outras três: absorbância A, coeficiente de extinção molar ε (M⁻¹cm⁻¹), concentração (M/mM/µM/nM) ou caminho óptico (cm/mm). Inclui a referência clássica NADH ε340 = 6220 M⁻¹cm⁻¹ (100 µM em cuba de 1 cm → A = 0,622), base dos ensaios de atividade enzimática.

Execução

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Escrito pela equipe Elysia Tools

Guia de uso da ferramenta

Veja quando usar esta ferramenta, o que ela suporta e como os usuários a aplicam.

Fatos principais

Categoria
Education
Tipos de entrada
select, number
Tipo de saída
json
Cobertura de exemplos
4
API pronta
Sim

Visão geral

Esta ferramenta calcula qualquer uma das quatro grandezas da Lei de Beer-Lambert (A = ε·c·l) a partir dos outros três parâmetros conhecidos. Permite determinar a absorbância, o coeficiente de extinção molar, a concentração ou o caminho óptico com conversão automática entre unidades molares (M, mM, µM, nM) e comprimentos de cuba (cm, mm).

Quando usar

  • Determinar a concentração desconhecida de uma amostra a partir da absorbância lida no espectrofotômetro.
  • Calcular o coeficiente de extinção molar (ε) experimental de uma nova substância ou cromóforo.
  • Prever a absorbância teórica esperada em ensaios enzimáticos ou diluições analíticas antes da medição.

Como funciona

  1. 1Selecione qual variável deseja calcular: absorbância (A), coeficiente de extinção molar (ε), concentração (c) ou caminho óptico (l).
  2. 2Insira os valores conhecidos para as outras três variáveis e selecione as unidades correspondentes de concentração (M, mM, µM, nM) e caminho óptico (cm, mm).
  3. 3Defina o número de casas decimais desejado para o resultado final.
  4. 4A ferramenta normaliza as unidades para o padrão do SI/Beer-Lambert (mol/L e cm), resolve a equação algébrica correspondente e exibe o valor calculado com o detalhamento do cálculo.

Casos de uso

  • Quantificação de ácidos nucleicos ou proteínas por absorbância em comprimentos de onda específicos (ex.: 260 nm ou 280 nm).
  • Monitoramento cinético de ensaios enzimáticos acoplados ao consumo ou produção de NADH a 340 nm.
  • Padronização de curvas de calibração e determinação de absortividade molar de corantes e complexos químicos.

Exemplos

1. Cálculo de absorbância esperada em ensaio enzimático com NADH

Bioquímico de bancada

Contexto

O pesquisador preparou uma reação enzimática contendo 100 µM de NADH e deseja validar a leitura do espectrofotômetro a 340 nm em uma cuba padrão de 1 cm.

Problema

Calcular a absorbância teórica esperada para verificar o alinhamento do equipamento.

Como usar

Selecione 'Absorbância (A)' no campo Calcular, defina ε como 6220, informe concentração de 100 em µM e caminho óptico de 1 cm.

Resultado

Obtém uma absorbância teórica de 0,6220 para conferência direta na bancada.

2. Determinação do coeficiente de extinção molar de um novo corante

Químico analítico

Contexto

Uma solução de 50 µM de um composto sintetizado apresentou absorbância de 1,200 em cuba com caminho óptico de 1 cm.

Problema

Calcular o valor exato de ε (M⁻¹cm⁻¹) para documentar nos métodos analíticos.

Como usar

Selecione 'Coeficiente de extinção ε (M⁻¹cm⁻¹)' no campo Calcular, insira absorbância 1.2, concentração de 50 em µM e caminho óptico de 1 cm.

Resultado

Perguntas frequentes

Qual é a fórmula fundamental da Lei de Beer-Lambert?

A fórmula é A = ε·c·l, onde A é a absorbância (adimensional), ε é o coeficiente de extinção molar (M⁻¹cm⁻¹), c é a concentração molar (mol/L) e l é o caminho óptico (cm).

Como a ferramenta lida com diferentes unidades de concentração?

A ferramenta converte automaticamente valores informados em mM, µM ou nM para mol/L (M) antes de calcular a equação de Beer-Lambert.

Como o caminho óptico em milímetros (mm) é tratado?

Se a espessura da cuba for informada em mm, o sistema converte internamente para centímetros (cm) para manter a compatibilidade com a unidade de ε (M⁻¹cm⁻¹).

Qual é o valor de referência do NADH a 340 nm?

O coeficiente de extinção molar padrão do NADH em 340 nm é ε = 6220 M⁻¹cm⁻¹, resultando em A = 0,622 para 100 µM em cuba de 1 cm.

A absorbância possui unidade de medida?

Não, a absorbância é uma grandeza adimensional, pois representa o logaritmo da razão entre a intensidade de luz incidente e a transmitida.

Tema

Quantificação por absorbância e cálculos ácido-base

Transforme leituras de instrumento em concentrações defensáveis — converta entre absorbância e transmitância, resolva a lei de Beer-Lambert para a variável que falta, percorra a cadeia de ácidos nucleicos de A260 a microgramas a nanomolar a cópias por microlitro, preveja o pH a partir de concentrações de ácidos e bases fortes, projete tampões com Henderson-Hasselbalch e verifique a dissociação pela condutividade molar.

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Conversor Absorbância↔Transmitância (A = −log₁₀T)

Converte nos dois sentidos entre absorbância e transmitância: A = −log₁₀(T), T = 10⁻ᴬ, %T = 100·T e A = 2 − log₁₀(%T). Aceita absorbância A, transmitância percentual %T ou transmitância fracionária T e devolve as três representações de uma vez. Referências: A=0 → %T=100; A=1 → %T=10; A=0,301 → %T=50. Absorbância negativa implicaria %T > 100 %, impossível na espectrofotometria padrão, e é rejeitada.

Education

Conversor de unidades de atividade enzimática (U ↔ katal)

Converte com exatidão entre unidades de atividade enzimática: 1 U = 1 µmol/min (IUB 1978), 1 kat = 1 mol/s (BIPM 1999), logo 1 U = 16,667 nkat, 1 µkat = 60 U e 1 kat = 6×10⁷ U. Insira um valor em U/mU/µU ou kat/mkat/µkat/nkat/pkat e obtenha a mesma atividade em todas as demais unidades. Conversão pura de escala, sem suposições de ensaio, útil para manuscritos e fichas técnicas. Fontes: comitê IUB, BIPM 21.ª CGPM, livro verde IUPAC. Apenas para educação.

Education

Calculadora de densidade celular OD600 (E. coli)

Converte turbidez OD600 em concentração celular e peso seco (CDW): OD normalizada = leitura × fator de diluição ÷ trajeto óptico; células/mL = OD × células por unidade de OD (1×10⁹ padrão, valor usual de E. coli); CDW g/L = OD × g/L por unidade de OD (0.36 padrão, BioNumbers 109837; faixa 0.3–0.5). Os dois fatores são editáveis — cepa, meio e instrumento os alteram; os padrões são autoconsistentes: 0.36 g/L ÷ 10⁹ células/mL = 0.36 pg/célula. Leituras OD > 1 são marcadas fora da faixa linear (Sigma-Aldrich). Fontes: BioNumbers 109835/109837, Agilent/VectorBuilder. Calibre com sua própria curva OD-UCF. Apenas para educação.

Education

Calculadora de afinidade proteína-DNA (estimativa de Kd)

Estima o Kd a partir de um ponto segundo o equilíbrio 1:1: com proteína em excesso, f = [P]÷([P]+Kd), logo Kd = [P]×(1−f)÷f; com f = 0,5 o Kd iguala a concentração de proteína. Duas entradas: fração ligada direta (0–1) ou anisotropia de fluorescência f = (r−rlivre)÷(rligado−rlivre). Acrescenta ΔG° = RT·ln(Kd) (25 °C por padrão). Faixas: <1 nM muito forte, 1–100 nM forte (alvos típicos de fatores de transcrição), 100 nM–1 µM moderada, >1 µM fraca (verificar sal e competidor poly(dI-dC)). Premissas: equilíbrio, 1:1, proteína em grande excesso; para curvas completas ajuste a titulação inteira. Fontes: Cantor & Schimmel, Heyduk & Lee 1990, Lakowicz. Apenas para educação.

O coeficiente de extinção molar calculado é 24 000 M⁻¹cm⁻¹.