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Coefficient d'Extinction Molaire et Loi de Beer-Lambert (A = ε·c·l)

· Dernière mise à jour：2026-08-22

Résout l'une des quatre grandeurs de la loi de Beer-Lambert A = ε·c·l à partir des trois autres : absorbance A, coefficient d'extinction molaire ε (M⁻¹cm⁻¹), concentration (M/mM/µM/nM) ou trajet optique (cm/mm). Inclut le repère classique NADH ε340 = 6220 M⁻¹cm⁻¹ (100 µM en cuve de 1 cm → A = 0,622), base des dosages d'activité enzymatique.

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Guide d'utilisation de l'outil

Découvrez quand utiliser cet outil, ce qu'il prend en charge et comment les utilisateurs l'appliquent.

Points clés

Catégorie
Education
Types d’entrée
select, number
Type de sortie
json
Exemples associés
4
API disponible
Oui

Aperçu

Cet outil applique la loi de Beer-Lambert (A = ε·c·l) pour déterminer rapidement l'une des quatre grandeurs optiques à partir des trois autres : absorbance, coefficient d'extinction molaire (ε), concentration ou longueur du trajet optique. Il prend en charge plusieurs unités de concentration (M, mM, µM, nM) et de trajet (cm, mm) avec un ajustement précis des décimales pour vos analyses spectrophotométriques.

Quand l’utiliser

  • Calculer la concentration d'une solution d'acide nucléique, de protéine ou de cofacteur après une mesure spectrophotométrique.
  • Déterminer le coefficient d'extinction molaire expérimental d'un nouveau composé à concentration connue.
  • Estimer l'absorbance théorique attendue pour ajuster une dilution ou dimensionner la taille de la cuve (1 cm, 2 mm, etc.).

Fonctionnement

  1. 1Choisissez la grandeur à calculer via le menu déroulant : absorbance, coefficient d'extinction ε, concentration ou longueur du trajet optique.
  2. 2Renseignez les trois valeurs connues ainsi que leurs unités respectives (M, mM, µM, nM pour la concentration ; cm ou mm pour le trajet optique).
  3. 3Définissez le nombre de décimales souhaité pour le résultat.
  4. 4L'outil convertit automatiquement les grandeurs en unités standards et applique la relation A = ε·c·l pour afficher la variable manquante.

Cas d’usage

  • Dosage de l'activité enzymatique par suivi de la disparition ou formation de NADH/NADPH à 340 nm.
  • Caractérisation spectroscopique d'un fluorophore, chromophore ou colorant nouvellement synthétisé.
  • Vérification rapide de la concentration d'échantillons en micro-cuves ou cuves standards de laboratoire.

Exemples

1. Vérification de l'absorbance d'un témoin NADH

Technicien de laboratoire en biochimie

Contexte

Un technicien prépare un étalon de NADH à 100 µM pour valider le bon fonctionnement de son spectrophotomètre avant un dosage enzymatique.

Problème

Vérifier la valeur théorique d'absorbance attendue à 340 nm dans une cuve standard de 1 cm.

Utilisation

Sélectionner 'Absorbance (A)' dans le champ Calculer, entrer ε = 6220, une concentration de 100 avec l'unité 'µM', et un trajet de 1 cm.

solveFor: absorbance, extinctionCoeff: 6220, concentration: 100, concUnit: uM, pathLength: 1, lengthUnit: cm, decimalPlaces: 3

Résultat

L'absorbance calculée est de 0,622.

2. Détermination du coefficient d'extinction d'un colorant

Chercheur en chimie analytique

Contexte

Un chercheur synthétise une nouvelle molécule absorbante et mesure son absorbance à concentration connue.

Problème

Calculer le coefficient d'extinction molaire d'une solution de 50 µM donnant une absorbance A = 1,200 dans une cuve de 1 cm.

Utilisation

FAQ

Quelles sont les unités utilisées pour le coefficient d'extinction molaire ?

Le coefficient d'extinction molaire ε est exprimé en M⁻¹·cm⁻¹ (ou L·mol⁻¹·cm⁻¹).

Quelles unités de concentration sont acceptées ?

Vous pouvez saisir ou obtenir la concentration en mol/L (M), mmol/L (mM), µmol/L (µM) ou nmol/L (nM).

Comment convertir la longueur d'une cuve de spectrophotométrie en millimètres ?

Sélectionnez l'unité 'mm' dans le champ de trajet optique ; l'outil convertit automatiquement la valeur en centimètres pour l'équation.

Quelle est la valeur de référence classique pour le NADH à 340 nm ?

À 340 nm, le coefficient d'extinction molaire du NADH est de 6 220 M⁻¹·cm⁻¹ (soit A = 0,622 pour 100 µM dans une cuve de 1 cm).

L'outil gère-t-il les écarts de linéarité de la loi de Beer-Lambert ?

L'outil applique la relation mathématique exacte A = ε·c·l. La vérification du domaine de linéarité optique (souvent A entre 0,1 et 1,5) dépend des conditions expérimentales de l'utilisateur.

Dossier

Quantification par absorbance et calculs acido-basiques

Changez des lectures d'appareil en concentrations défendables — passez de l'absorbance à la transmittance et retour, résolvez la loi de Beer-Lambert pour la variable manquante, parcourez la chaîne des acides nucléiques de A260 aux microgrammes aux nanomolaires aux copies par microlitre, prédisez le pH depuis les concentrations d'acides et de bases fortes, concevez des tampons par Henderson-Hasselbalch et vérifiez la dissociation par la conductivité molaire.

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Convertisseur Absorbance↔Transmittance (A = −log₁₀T)

Convertit dans les deux sens absorbance et transmittance : A = −log₁₀(T), T = 10⁻ᴬ, %T = 100·T et A = 2 − log₁₀(%T). Accepte l'absorbance A, la transmittance en pourcentage %T ou en fraction T et renvoie les trois représentations à la fois. Repères : A=0 → %T=100 ; A=1 → %T=10 ; A=0,301 → %T=50. Une absorbance négative impliquerait %T > 100 %, impossible en spectrophotométrie standard, et est rejetée.

Education

Convertisseur d'unités d'activité enzymatique (U ↔ katal)

Convertissez avec exactitude les unités d'activité enzymatique : 1 U = 1 µmol/min (IUB 1978), 1 kat = 1 mol/s (BIPM 1999), d'où 1 U = 16,667 nkat, 1 µkat = 60 U et 1 kat = 6×10⁷ U. Saisissez une valeur en U/mU/µU ou kat/mkat/µkat/nkat/pkat et lisez la même activité dans toutes les autres unités. Conversion d'échelle pure, sans hypothèse d'essai, pratique pour manuscrits et fiches techniques. Sources : comité IUB, BIPM 21ᵉ CGPM, livre vert IUPAC. Uniquement à but éducatif.

Education

Calculateur de densité cellulaire OD600 (E. coli)

Convertit la turbidité OD600 en concentration cellulaire et poids sec (CDW) : OD normalisée = lecture × facteur de dilution ÷ trajet optique ; cellules/mL = OD × cellules par unité d'OD (1×10⁹ par défaut, valeur usuelle d'E. coli) ; CDW g/L = OD × g/L par unité d'OD (0.36 par défaut, BioNumbers 109837 ; plage 0.3–0.5). Les deux facteurs sont modifiables — souche, milieu et instrument les influencent ; les valeurs par défaut sont auto-cohérentes : 0.36 g/L ÷ 10⁹ cellules/mL = 0.36 pg/cellule. Les lectures OD > 1 sont signalées hors plage linéaire (Sigma-Aldrich). Sources : BioNumbers 109835/109837, Agilent/VectorBuilder. Calibrez avec votre propre courbe OD-CFU. Uniquement pour l'éducation.

Education

Calculateur d'affinité protéine-ADN (estimation de Kd)

Estime le Kd à partir d'un point selon l'équilibre 1:1 : en excès de protéine, f = [P]÷([P]+Kd), donc Kd = [P]×(1−f)÷f ; à f = 0,5 le Kd égale la concentration en protéine. Deux entrées : fraction liée directe (0–1) ou anisotropie de fluorescence f = (r−rlibre)÷(rlié−rlibre). Ajoute ΔG° = RT·ln(Kd) (25 °C par défaut). Bandes : <1 nM très forte, 1–100 nM forte (cibles typiques de facteurs de transcription), 100 nM–1 µM modérée, >1 µM faible (vérifier sel et compétiteur poly(dI-dC)). Hypothèses : équilibre, 1:1, protéine en grand excès ; pour une courbe complète, ajuster toute la titration. Sources : Cantor & Schimmel, Heyduk & Lee 1990, Lakowicz. Uniquement pour l'éducation.

Sélectionner 'Coefficient d'extinction ε' dans Calculer, saisir A = 1.2, concentration = 50 µM, et trajet = 1 cm.

solveFor: extinctionCoefficient, absorbance: 1.2, concentration: 50, concUnit: uM, pathLength: 1, lengthUnit: cm, decimalPlaces: 2

Résultat

Le coefficient d'extinction molaire obtenu est de 24 000 M⁻¹·cm⁻¹.