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Convierta lecturas de instrumento en concentraciones defendibles — pase entre absorbancia y transmitancia, resuelva la ley de Beer-Lambert para la variable que falte, recorra la cadena de ácidos nucleicos de A260 a microgramos a nanomolar a copias por microlitro, prediga el pH desde concentraciones de ácidos y bases fuertes, diseñe tampones con Henderson-Hasselbalch y verifique la disociación mediante conductividad molar.
¿Nuevo en este flujo? Sigue los pasos en orden, empezando por la primera herramienta abajo. ¿Ya sabes lo que necesitas? Ve directo al paso correspondiente: todas las herramientas de este flujo están en la tabla comparativa.
Primera herramienta: Conversor Absorbancia↔Transmitancia (A = −log₁₀T)
Temas
| Herramienta | Qué hace | Categoría |
|---|---|---|
| Conversor Absorbancia↔Transmitancia (A = −log₁₀T) | Convierte en ambos sentidos entre absorbancia y transmitancia: A = −log₁₀(T), T = 10⁻ᴬ, %T = 100·T y A = 2 − log₁₀(%T). Acepta absorbancia A, transmitancia porcentual %T o transmitancia decimal T y devuelve las tres representaciones a la vez. Valores guía: A=0 → %T=100; A=1 → %T=10; A=0,301 → %T=50. Una absorbancia negativa implicaría %T > 100 %, imposible en espectrofotometría estándar, y se rechaza. | Education |
| Coeficiente de Extinción Molar y Ley de Beer-Lambert (A = ε·c·l) | Resuelve cualquiera de las cuatro magnitudes de la ley de Beer-Lambert A = ε·c·l a partir de las otras tres: absorbancia A, coeficiente de extinción molar ε (M⁻¹cm⁻¹), concentración (M/mM/µM/nM) o camino óptico (cm/mm). Incluye el ancla clásico NADH ε340 = 6220 M⁻¹cm⁻¹ (100 µM en cubeta de 1 cm → A = 0,622), base de los ensayos de actividad enzimática. | Education |
| Calculadora de concentración de ADN (absorbancia A260) |
Temas
| Determina la concentración de ADN por absorbancia UV a 260 nm: concentración (µg/mL) = A260 × factor de dilución × constante ÷ camino óptico (cm). Constantes: ADN doble cadena 1 OD = 50 µg/mL, ADN monocadena 1 OD = 33 µg/mL (ARN 40, ver herramienta de ARN). 1 µg/mL = 1 ng/µL; introduzca el volumen de elución para obtener el rendimiento total en µg. Incluye la ventana lineal 0.1–1.5: por debajo de 0.1 domina el ruido, por encima de 1.5 el detector puede saturarse. La pureza se evalúa con OD260/280. Fuentes: Marmur & Doty 1961/1962, Sambrook & Russell, Thermo Fisher NanoDrop. Solo para educación y planificación experimental. |
| Education |
| Calculadora de concentración molar de ADN (µg/mL → nM) | Convierte la concentración másica de ADN en concentración molar: nM = µg/mL × 10⁶ ÷ (masa por par de bases × bp). Masas medias según NEB: ADN doble cadena 650 Da/bp, ADN monocadena 330 Da/nt (Promega usa 660). Trampa habitual: con 10⁻³ en el denominador se obtiene µM, no nM (error de 1000×). 1 µg/mL = 1 ng/µL; con el volumen se calculan los pmol totales y las moléculas por µL. Fuentes: NEB NEBioCalculator, Promega BioMath, N_A = 6.022×10²³. Solo para educación y planificación experimental. | Education |
| Calculadora de número de copias de ADN (concentración → copias) | Convierte la concentración másica de ADN en copias moleculares por microlitro: copias/µL = c(g/µL) × N_A ÷ (longitud pb × 660 g/mol). Admite ng/µL (salida típica de NanoDrop, idéntico a µg/mL), pg/µL (rango Qubit) y µg/µL; incluye la conversión a pmol/µL y el total de copias en un volumen opcional. Referencia: un plásmido de 5.000 pb a 50 ng/µL → 9.12×10⁹ copias/µL (0.0152 pmol/µL). Recordatorios: 660 Da/pb es un promedio suficiente para plásmidos/genoma/amplicones (para oligos exactos sume masa por base); el A260 sobreestima muestras con ARN/nucleótidos libres — para exactitud use ensayo con fluoróforo. Fuentes: constante de Avogadro SI 2019, convención Thermo Fisher, Sambrook & Russell. Solo planificación. | Education |
| Calculadora de pH | Convierte entre pH, [H+], pOH y [OH-], o calcula el pH a partir de la concentración de un ácido o base fuerte, y el pH tras dilución. Basado en Kw = 1×10⁻¹⁴ (25 °C). | Math & Numbers |
| Calculadora de pH y Tampón | Calcula el pH de soluciones tampón usando la ecuación de Henderson-Hasselbalch, o halla la relación necesaria para un pH objetivo. Incluye sistemas tampón comunes (acetato, fosfato, Tris, HEPES, etc.). | Math & Numbers |
| Calculadora de la conductividad molar | Conductividad molar Λm = κ/c, en S·cm²/mol y S·m²/mol; añade la conductividad molar límite Λ°m y se desbloquean el grado de disociación α = Λm/Λ°m y la constante acida Ka = cα²/(1−α) para electrolitos débiles 1:1. Anclas: KCl 0.01 M (κ = 1412 µS/cm) da Λm = 141.2 S·cm²/mol, el 94% de su límite de 149.9 — electrolito fuerte; el ácido acético 0.01 M solo llega a 16.3, un α del 4.2% y la famosa Ka ≈ 1.8×10⁻⁵. | Science & Education |
Un instrumento reporta una señal — un porcentaje de luz que pasó, un voltaje, una aguja — y la pregunta de laboratorio siempre es una concentración. La distancia entre ambas es matemática, y cada paso es comprobable. Este flujo recorre esa distancia de forma explícita — la conversión de transmitancia a absorbancia que vuelve legible la lectura nativa del fotómetro, la ley de Beer-Lambert que ata la absorbancia a la concentración, la cadena de ácidos nucleicos que lleva una sola lectura por tres sistemas de unidades, y las predicciones ácido-base que dicen lo que una disolución de composición declarada debe hacer. La preparación — pesar solutos, diluir madres — pertenece al flujo de cálculos de laboratorio; esta página empieza donde la muestra ya existe y la pregunta es cuánto hay de qué en ella.
Beer-Lambert parece una fórmula y funciona como una palanca — absorbancia igual a coeficiente por concentración por camino — y cualquiera de las cuatro cede en cuanto las otras tres se conocen. La mayoría de los días la incógnita es la concentración y el coeficiente es una constante publicada. Los días que más importan son los de calibración — una disolución de concentración conocida, bien medida, rinde el coeficiente de extinción mismo, y todo lo cuantificado después descansa sobre ese único número honesto. La disciplina está en las unidades — coeficiente en unidades molares, camino en centímetros, concentración llegando en unidades molares — porque un resultado con unidades barajadas no es incorrecto, es carente de sentido, y aun así se imprimirá.
La cuantificación de ácidos nucleicos son tres conversiones con un solo abrigo. La lectura A260 se vuelve concentración másica por la regla estándar; la concentración másica se vuelve molar a través de la longitud en pares de bases y la convención de daltones por base; la molar se vuelve copias por microlitro por el número de Avogadro. La cadena vale lo que vale su convención más débil — use el factor de cadena sencilla para muestras de cadena sencilla, el de doble cadena para dobles, y sobre todo lleve una sola longitud de pares de bases por todas las etapas, porque una longitud cambiada a mitad de cadena produce números que concuerdan entre sí y mienten sobre la muestra.
La matemática ácido-base se divide limpio en dos regímenes. Los ácidos y bases fuertes están totalmente disociados, así que la concentración analítica entrega el pH directamente — sin equilibrio, sin aproximación. Los ácidos débiles y sus sales viven en el territorio de Henderson-Hasselbalch, donde el pKa y la proporción del par conjugado deciden el pH, y el tampón solo existe dentro de aproximadamente una unidad del pKa — fuera de esa ventana la ecuación sigue calculando, pero la química ya no amortigua. La conductividad molar aporta el testigo independiente — la conductancia medida contra el valor límite da el grado de disociación y la constante de disociación, evidencia que concuerda con el pH o desenmascara una suposición que nunca fue cierta.
Guía de flujo de trabajo
Convierta entre transmitancia, lo que muchos instrumentos reportan, y absorbancia, lo que toda ecuación espera, para que la lectura entre en la matemática con la moneda correcta.
Aplique la relación de Beer-Lambert — absorbancia igual a coeficiente de extinción por concentración por camino óptico — resolviendo la que falte de las cuatro, sea cuantificando una desconocida o calibrando un coeficiente contra un estándar.
Vaya de la lectura A260 a concentración másica con la regla estándar, de masa a molar mediante la longitud en pares de bases, y de molar a copias por microlitro con Avogadro — una cadena, una longitud, tres números defendibles.
Calcule el pH desde concentraciones de ácidos y bases fuertes donde la disociación es completa, diseñe tampones de ácido débil con Henderson-Hasselbalch dentro de su ventana de trabajo, y contraste el grado de disociación mediante conductividad molar cuando el comportamiento de la disolución exija evidencia independiente.
La regla de A260 — cincuenta microgramos por mililitro por unidad de absorbancia para ADN de doble cadena — es rápida y ajena a la secuencia, mientras que el coeficiente derivado de la secuencia es preciso pero exige la composición de bases — elija la regla para el trabajo rutinario y el coeficiente cuando el número alimenta una reacción posterior.
Un ácido o base fuerte está totalmente disociado, así que la concentración analítica le entrega el pH directamente, mientras que un ácido débil con su base conjugada necesita Henderson-Hasselbalch y un pKa honesto — elija por lo que la disolución contiene, no por cuál ecuación es más corta.
Con tres de absorbancia, coeficiente, concentración y camino óptico conocidos, la cuarta sigue — medir una concentración desconocida con coeficiente conocido es cuantificación de rutina, y medir el coeficiente con concentración conocida es como se construyen las curvas de calibración.