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Calculadora de temperatura de anelamento PCR (Ta = Tm − 5°C)

Calcula a temperatura de anelamento (Ta) da PCR por duas regras: a regra simples de bancada Ta = Tm − 5°C (usando o MENOR Tm do par de primers) e a fórmula empírica de Rychlik 1990: Ta = 0.3×Tm(primer) + 0.7×Tm(produto) − 14.9 (o Tm do produto costuma ser 75–90°C e a fórmula fica 1–8°C acima da regra simples em pares típicos). Fornece a Ta recomendada, faixa de gradiente ±3°C e a direção de ajuste: Ta baixa dá bandas inespecíficas e dímeros, alta sem produto; mantenha os dois Tm dentro de 2–3°C e anele pelo menor. Fontes: Rychlik 1990, Innis & Gelfand 1990, Lorenz 2012. Apenas planejamento experimental.