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Calculadora de temperatura de anelamento PCR (Ta = Tm − 5°C)
Calcula a temperatura de anelamento (Ta) da PCR por duas regras: a regra simples de bancada Ta = Tm − 5°C (usando o MENOR Tm do par de primers) e a fórmula empírica de Rychlik 1990: Ta = 0.3×Tm(primer) + 0.7×Tm(produto) − 14.9 (o Tm do produto costuma ser 75–90°C e a fórmula fica 1–8°C acima da regra simples em pares típicos). Fornece a Ta recomendada, faixa de gradiente ±3°C e a direção de ajuste: Ta baixa dá bandas inespecíficas e dímeros, alta sem produto; mantenha os dois Tm dentro de 2–3°C e anele pelo menor. Fontes: Rychlik 1990, Innis & Gelfand 1990, Lorenz 2012. Apenas planejamento experimental.
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Guia de uso da ferramenta
Veja quando usar esta ferramenta, o que ela suporta e como os usuários a aplicam.
Fatos principais
Categoria
Education
Tipos de entrada
select, number
Tipo de saída
json
Cobertura de exemplos
4
API pronta
Sim
Visão geral
A Calculadora de temperatura de anelamento PCR estima a Ta recomendada a partir dos Tm dos primers. Escolha a regra simples, que usa o menor Tm menos 5°C, ou a fórmula de Rychlik 1990, e obtenha também uma faixa de gradiente de ±3°C para o planejamento experimental.
Quando usar
Para estimar a temperatura de anelamento de um par de primers antes da PCR.
Para comparar a regra simples Ta = Tm − 5°C com a fórmula de Rychlik 1990.
Para definir uma faixa inicial de gradiente e avaliar a diferença entre os Tm dos primers.
Como funciona
1Selecione a regra de cálculo: Regra simples ou Fórmula de Rychlik.
2Informe os Tm dos primers forward e reverse; a regra simples usa o menor valor.
3Para Rychlik, informe também o Tm do produto e use Ta = 0,3×Tm(primer) + 0,7×Tm(produto) − 14,9.
4A calculadora exibe a Ta escolhida, a faixa de gradiente de ±3°C e a orientação de ajuste.
Casos de uso
Planejamento de PCR convencional com primers já selecionados.
Otimização inicial de PCR por gradiente de temperatura.
Comparação de estimativas de Ta para melhorar a especificidade do anelamento.
Exemplos
1. Regra simples para um par de primers padrão
Pesquisador em biologia molecular
Contexto
O pesquisador tem um primer forward com Tm de 62°C e um primer reverse com Tm de 60°C.
Problema
Definir uma Ta inicial e uma faixa de temperaturas para um gradiente de PCR.
Como usar
Selecione a Regra simples, informe forwardTm = 62°C e reverseTm = 60°C. O Tm do produto pode permanecer em 85°C como referência.