Quel Tm faut-il utiliser avec la règle simple ?

Le calcul utilise le plus petit Tm des deux amorces, puis soustrait 5 °C.

À quoi sert la formule de Rychlik ?

Elle estime la Ta en tenant compte du Tm de l’amorce et du Tm du produit PCR.

Pourquoi le calculateur propose-t-il un gradient de ±3 °C ?

Cette plage permet de tester des températures légèrement plus basses ou plus hautes autour de la Ta recommandée.

Quelle différence de Tm faut-il viser entre les deux amorces ?

Les deux Tm doivent idéalement rester à environ 2–3 °C l’un de l’autre.

Que signifie une Ta trop basse ou trop haute ?

Une Ta trop basse peut favoriser les bandes non spécifiques et les dimères, tandis qu’une Ta trop haute peut empêcher l’obtention d’un produit.

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Calculateur de température d'hybridation PCR (Ta = Tm − 5°C)

Calcule la température d'hybridation (Ta) de la PCR selon deux règles : la règle simple de paillasse Ta = Tm − 5°C (en prenant le PLUS PETIT Tm de la paire d'amorces) et la formule empirique de Rychlik 1990 : Ta = 0.3×Tm(amorce) + 0.7×Tm(produit) − 14.9 (le Tm du produit est typiquement de 75–90°C et la formule tombe 1–8°C au-dessus de la règle simple pour des paires classiques). Fournit la Ta recommandée, une plage de gradient ±3°C et le sens d'ajustement : Ta trop basse donne bandes non spécifiques et dimères, trop haute aucun produit ; gardez les deux Tm à 2–3°C près et hybridez sur le plus petit. Sources : Rychlik 1990, Innis & Gelfand 1990, Lorenz 2012. Uniquement pour la planification.

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1. Paire d’amorces standard avec la règle simple

2. Formule de Rychlik pour une borne haute

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