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Calculadora de temperatura de anillado PCR (Ta = Tm − 5°C)
Calcula la temperatura de anillado (Ta) de la PCR con dos reglas: la regla simple de banco Ta = Tm − 5°C (tomando el MENOR Tm del par de cebadores) y la fórmula empírica de Rychlik 1990: Ta = 0.3×Tm(cebador) + 0.7×Tm(producto) − 14.9 (el Tm del producto suele ser 75–90°C y la fórmula cae 1–8°C por encima de la regla simple en pares típicos). Entrega la Ta recomendada, un rango de gradiente ±3°C y la dirección de ajuste: Ta baja produce bandas inespecíficas y dímeros, Ta alta sin producto; mantenga los dos Tm dentro de 2–3°C y anille con el menor. Fuentes: Rychlik 1990, Innis & Gelfand 1990, Lorenz 2012. Solo planificación experimental.
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Guía de uso de la herramienta
Conoce cuándo usar esta herramienta, qué admite y cómo la aplican los usuarios.
Datos clave
Categoría
Education
Tipos de entrada
select, number
Tipo de salida
json
Cobertura de ejemplos
4
API disponible
Sí
Resumen
Calcula la temperatura de anillado (Ta) para una PCR a partir de los valores Tm de los cebadores y del producto. Elige la regla simple, Ta = Tm menor − 5 °C, o la fórmula empírica de Rychlik 1990; obtén también un rango de gradiente de ±3 °C para la planificación experimental.
Cuándo usarlo
Cuando necesitas estimar la Ta inicial de un par de cebadores para una PCR.
Cuando quieres comparar la regla simple con la fórmula de Rychlik usando el Tm del producto.
Cuando vas a planificar una PCR de gradiente y necesitas un intervalo de temperaturas.
Cómo funciona
1Introduce los Tm del cebador forward y del cebador reverse.
2Selecciona la regla simple o la fórmula de Rychlik 1990 e introduce el Tm del producto.
3La regla simple usa el menor Tm de los cebadores y resta 5 °C; Rychlik calcula 0,3 × Tm del cebador + 0,7 × Tm del producto − 14,9.
4La calculadora muestra la Ta recomendada, un rango de gradiente de ±3 °C y la orientación para ajustar la temperatura.
Casos de uso
Planificación inicial de protocolos de PCR con un par de cebadores.
Comparación de una Ta basada en Tm con una estimación que incorpora el Tm del amplicón.
Diseño de un ensayo de PCR en gradiente para explorar la especificidad de la reacción.
Ejemplos
1. Par estándar con regla simple: Ta de 55 °C
Investigadora de biología molecular
Contexto
Un par de cebadores tiene un Tm forward de 62 °C y un Tm reverse de 60 °C; el Tm estimado del producto es de 85 °C.
Problema
Necesita una temperatura inicial de anillado y un intervalo de gradiente para optimizar la PCR.
Cómo usarlo
Selecciona la regla simple e introduce 62 °C, 60 °C y 85 °C como valores de Tm.