# 寡核苷酸 Tm 计算器（盐浓度校正） 两条经典 Tm 估算式：Wallace 规则 Tm = 2×(A+T) + 4×(G+C)（<14 nt 短链，不含盐依赖）；盐校正公式 Tm = 81.5 + 16.6×log₁₀[Na⁺] + 0.41×(%G+C) − 600/n（Sambrook 1989 p.11.46，Primer3 同式；长度项各文献为 500–675/n）。自动模式按长度切换。输出 GC%、碱基组成与两种方法结果对照。两者均为近似——设计级精度请用最近邻热力学（见配套 pcr-primer-tm 工具）。假设：DNA、无错配、无甲酰胺/DMSO、[Na⁺] 0.01–1 M。来源：Wallace 1979、von Ahsen 2001、Sambrook & Maniatis、OligoCalc。仅供教学与实验规划。 > 标准页面: https://elysiatools.com/zh/tools/oligo-melting-temperature - **分类:** Education - **关键词:** 寡核苷酸 Tm 计算器, 解链温度 盐校正, Wallace 规则 Tm, Tm 81.5 16.6 log 钠离子, 寡核苷酸 GC 含量, 引物 Tm 估算, 杂交温度, 短链寡核苷酸 Tm, Sambrook Tm 公式, 分子生物学, 实验计算器 ## 概述 寡核苷酸 Tm 计算器根据 DNA 序列、计算方法和钠离子浓度，估算寡核苷酸的解链温度，并输出长度、GC 含量、碱基组成、Wallace 规则结果及盐校正结果。计算结果仅供教学和实验规划参考。 ## 输入项 - **寡核苷酸序列（5'→3'）** (text): DNA sequence, A/C/G/T only (spaces stripped, case-insensitive), 4–200 nt. - **Tm 计算方法** (select): Auto uses Wallace below 14 nt and the salt-corrected formula from 14 nt up. - **钠离子浓度（mM）** (number): Total \[Na⁺\] (or equivalent monovalent) of the buffer; used by the salt-corrected formula. - **小数位数** (number) ## 适用场景 - 快速估算 DNA 寡核苷酸或短探针的解链温度。 - 比较 Wallace 规则与盐校正公式在不同序列和盐浓度下的结果。 - 查看序列长度、GC 含量和碱基组成，为杂交或实验规划提供参考。 ## 工作原理 - 输入 5'→3' 方向的 DNA 序列，工具会忽略空格并按大小写不敏感方式读取 A、C、G、T。 - 选择自动、Wallace 规则或盐校正公式；自动模式对长度小于 14 nt 的序列使用 Wallace 规则，对 14 nt 及以上序列使用盐校正公式。 - 输入钠离子浓度，盐校正公式会使用以 M 为单位的 \[Na⁺\] 计算盐效应。 - 工具输出 Tm 估值、使用的方法、GC 百分比、序列长度、碱基组成以及两种公式的结果对照。 ## 使用案例 - 分子生物学教学中演示序列长度、GC 含量和盐浓度对 Tm 估值的影响。 - 实验规划阶段快速检查寡核苷酸或短探针的近似杂交温度。 - 比较不同 DNA 序列的 GC 组成和 Wallace、盐校正两种 Tm 估算结果。 ## 常见问题 ### 支持什么类型的序列？ 支持仅包含 A、C、G、T 的 DNA 序列，长度为 4–200 nt。 ### 自动模式如何选择公式？ 长度小于 14 nt 时使用 Wallace 规则，长度为 14 nt 及以上时使用盐校正公式。 ### 钠离子浓度会影响哪项计算？ 钠离子浓度用于盐校正公式；Wallace 规则不包含盐浓度项。 ### 计算结果适合直接设计 PCR 引物吗？ 不适合直接作为设计级精度依据。两种方法都是近似估算，精确设计应使用最近邻热力学模型。 ### 计算时有哪些假设？ 计算假设为 DNA、无错配、无甲酰胺或 DMSO，且钠离子浓度在 0.01–1 M 范围内。 ## 相关工具 - [PCR 退火温度计算器（Ta = Tm − 5°C）](https://elysiatools.com/zh/tools/annealing-temperature-calculator): 计算 PCR 退火温度 Ta，支持两条规则：实验台默认的简单规则 Ta = Tm − 5°C（取引物对中较低的 Tm），与 Rychlik 1990 经验公式 Ta = 0.3×Tm(引物) + 0.7×Tm(产物) − 14.9（产物 Tm 通常 75–90°C，对典型引物对比简单规则高 1–8°C）。输出推荐 Ta、±3°C 梯度范围以及调温方向指引：温度过低出现非特异带与引物二聚体，过高则无扩增；两条引物 Tm 差应控制在 2–3°C 内并按较低者退火。来源：Rychlik 1990、Innis & Gelfand 1990、Lorenz 2012。仅供实验规划。 - [常染色体显性遗传系谱分析器](https://elysiatools.com/zh/tools/autosomal-dominant-pedigree): 计算常染色体显性（AD）遗传的子代风险并评估观察数据与预期比例的拟合度。亲本基因型组合决定预期患病比例：AA × 任意 = 全部患病；Aa × Aa = 3:1（75%）；Aa × aa = 1:1（50%）；aa × aa = 无。观察计数可做卡方检验（df = 1，α = 0.05 临界值 3.841）。系谱特征清单：垂直传递（代代出现）、两性患病率相近、父传子存在（可排除 X 连锁显性）、未患病者一般不传递（除新发突变）。示例疾病：亨廷顿病、软骨发育不全、马凡综合征。来源：Griffiths、Hartl & Clark 2007、StatPearls、OMIM。仅供教学用途。 - [常染色体隐性遗传风险计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/autosomal-recessive-risk): 计算常染色体隐性遗传病在每个孩子及 n 个孩子中的患病概率。患病孩子（aa）必须从父母双方各得一个隐性等位基因：P(子代患病) = P(亲本1传 a) × P(亲本2传 a)。支持亲本状态：携带者（Aa）、患者（aa）、非携带者（AA）、未知（由群体携带率 c 推断：P(Aa)=c、P(aa)=c²）。双携带者 → 每胎 25% 患病、50% 携带、未患病子女为携带者的概率 2/3；n 个孩子至少一个患病 = 1 − (1−r)^n。默认携带率 0.04（北欧裔囊性纤维化 1/25）。来源：Griffiths、Hartl & Clark 2007、StatPearls。仅供教学用途，不能替代遗传咨询。 - [血球计数板细胞计数计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/cell-counting-hemocytometer): 把血球计数板（改良 Neubauer）的原始计数换算为细胞浓度：cells/mL =（计数总数 ÷ 大方格数）× 稀释倍数 × 10⁴（每个 1 mm² 大方格在 0.1 mm 深度下容积恰为 0.1 µL）。输入计数总数、方格数（通常 4 个角格或加中央共 5 格）与稀释倍数，可选填样品体积以得到总细胞数；并按每格 20–100 个细胞的理想密度给出操作建议。来源：Freshney 细胞培养手册、Neubauer 改良室几何规格。仅供教学与实验规划。 - [细胞倍增时间计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/cell-doubling-time): 由两次细胞计数计算指数生长期动力学：倍增时间 t_d = ln2 × t ÷ ln(Nₜ/N₀)，同时给出倍增次数 n = ln(Nₜ/N₀) ÷ ln2 与比生长速率 μ = ln(Nₜ/N₀)/t（h⁻¹）。N₀/Nₜ 可为细胞数或任意一致单位的密度，时间支持小时/天/分钟。前提是两点都处于对数期（接种低于汇合、收获早于接触抑制），否则 t_d 会偏高；并附 HEK293/HeLa/CHO 常见倍增时间参照。来源：Freshney 细胞培养手册。仅供教学与实验规划。 - [台盼蓝细胞活力计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/cell-viability-trypan-blue): 由台盼蓝拒染试验的活/死细胞计数计算活力：活力 % = 活 ÷（活 + 死）× 100；活细胞浓度 = 活细胞计数 × 稀释倍数 × 10⁴ ÷ 大方格数。台盼蓝不能透过完整细胞膜，活细胞明亮未着色、膜受损细胞染成深蓝。结果附培养状态判读（≥90% 健康、70–90% 可接受、<70% 受损）与操作要点（染色后 3–5 分钟内计数，暴露过久会杀死活细胞）。来源：Freshney《Culture of Animal Cells》、Strober 拒染试验方案。仅供教学与实验规划。 - [CFU/mL 菌落形成单位计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/cfu-calculator): 把平板菌落计数换算为原始培养物浓度：CFU/mL = 菌落数 × 10ⁿ ÷ 接种体积（mL），其中平皿接种自 10⁻ⁿ 稀释管。内置标准可计数范围 30–300 个/皿的判读：>300 提示 TNTC（过多无法计数，需加大稀释度），<30 提示 TFTC（过少误差大，需降低稀释度），0 个菌落给出检测限 LOD；可选填原始样品体积换算总 CFU。来源：Standard Methods 平板计数法、FDA BAM。仅供教学与实验规划。 - [DNA 拷贝数计算器（浓度 → 拷贝数）](https://elysiatools.com/zh/tools/dna-copy-number-calculator): 把 DNA 质量浓度换算成每微升分子拷贝数：copies/µL = 浓度(g/µL) × 阿伏伽德罗常数 ÷ (长度bp × 660 g/mol)。支持 ng/µL（NanoDrop 常用，与 µg/mL 等值）、pg/µL（Qubit 量程）与 µg/µL；附 pmol/µL 摩尔量换算与可选体积的总拷贝数。参考值：5000 bp 质粒 50 ng/µL → 9.12×10⁹ 拷贝/µL（0.0152 pmol/µL）。提醒：660 Da/bp 为平均值，对质粒/基因组/扩增片段足够精确，精确寡核苷酸请逐碱基求和；A260 会因 RNA/游离核苷酸污染而高估，准确定量建议用荧光染料法。来源：SI 2019 阿伏伽德罗常数、Thermo Fisher 惯例、Sambrook & Russell。仅供实验规划。 ## 示例 - [Web Python 图像处理示例](https://elysiatools.com/zh/samples/web-image-processing-python): Web Python 图像处理示例，使用 PIL/Pillow 包括读取、保存、缩放和格式转换 - [Android Java 图像处理示例](https://elysiatools.com/zh/samples/android-image-processing-java): Android Java 图像处理示例，包括图像读取保存、缩放和格式转换 - [Android Kotlin 图像处理示例](https://elysiatools.com/zh/samples/android-image-processing-kotlin): Android Kotlin 图像处理示例，包括图像读取保存、缩放和格式转换 - [Web Rust 图像处理示例](https://elysiatools.com/zh/samples/web-image-processing-rust): Web Rust 图像处理示例，包括图像读取保存、缩放和格式转换 ## 相关内容 - [音频编码与格式转换工具](https://elysiatools.com/zh/hubs/audio-convert): 在一个专题里比较音频格式转换、码率调整、采样率转换、编码切换和导出工具，适合交付与归档工作流。 - [图片格式转换与动画导出工具](https://elysiatools.com/zh/hubs/image-convert): 在一个专题里比较 JPG、PNG、GIF、AVIF、WebP、TIFF、ICO、base64 以及动画导出相关的图片格式转换工具。 - [JSON 交换与格式翻译工具](https://elysiatools.com/zh/hubs/json-convert): 在一个专题里比较 JSON 与 CSV、YAML、TOML、GraphQL、XML、Markdown、Excel、BSON、EDN 等结构化格式之间的转换工具。 - [面向网页与印刷的色彩空间转换工具](https://elysiatools.com/zh/hubs/design-convert): 围绕网页到印刷的色彩空间转换整理的一组工具。