# PCR 退火温度计算器（Ta = Tm − 5°C） 计算 PCR 退火温度 Ta，支持两条规则：实验台默认的简单规则 Ta = Tm − 5°C（取引物对中较低的 Tm），与 Rychlik 1990 经验公式 Ta = 0.3×Tm(引物) + 0.7×Tm(产物) − 14.9（产物 Tm 通常 75–90°C，对典型引物对比简单规则高 1–8°C）。输出推荐 Ta、±3°C 梯度范围以及调温方向指引：温度过低出现非特异带与引物二聚体，过高则无扩增；两条引物 Tm 差应控制在 2–3°C 内并按较低者退火。来源：Rychlik 1990、Innis & Gelfand 1990、Lorenz 2012。仅供实验规划。 > 标准页面: https://elysiatools.com/zh/tools/annealing-temperature-calculator - **分类:** Education - **关键词:** 退火温度, PCR Ta 计算器, Tm 减 5, Rychlik 公式, 引物退火, PCR 优化, 梯度 PCR, 引物 Tm, PCR 方案, 引物设计, PCR, 分子生物学 ## 概述 PCR 退火温度计算器根据两条引物的 Tm 计算推荐退火温度 Ta：可选择简单规则（较低引物 Tm − 5°C）或 Rychlik 1990 公式，并输出 ±3°C 梯度范围及温度调整参考，仅供实验规划使用。 ## 输入项 - **计算规则** (select): Simple rule uses the lower primer Tm; Rychlik also weighs the product Tm. - **正向引物 Tm（°C）** (number): Melting temperature of the forward primer. - **反向引物 Tm（°C）** (number): Melting temperature of the reverse primer. - **产物 Tm（°C，Rychlik）** (number): Amplicon melting temperature (typically 75–90°C for a 100–500 bp product); used by the Rychlik formula. - **小数位数** (number) ## 适用场景 - 已知正向和反向引物 Tm，需要快速估算 PCR 退火温度时。 - 想用 Rychlik 公式结合产物 Tm 进行退火温度交叉比较时。 - 准备梯度 PCR，需要获得推荐温度上下 3°C 的测试范围时。 ## 工作原理 - 输入正向引物 Tm、反向引物 Tm 和产物 Tm，并选择计算规则。 - 简单规则取两条引物中较低的 Tm，再减去 5°C。 - Rychlik 公式按 Ta = 0.3×Tm(引物) + 0.7×Tm(产物) − 14.9 计算。 - 工具输出所选规则的 Ta、±3°C 梯度范围，以及较低或较高温度可能对应的扩增现象。 ## 使用案例 - 分子生物学实验人员为新引物对制定 PCR 初始退火温度。 - 研究生比较简单规则与 Rychlik 公式的推荐值。 - 实验人员根据 ±3°C 梯度范围设计梯度 PCR 温度条件。 ## 常见问题 ### 简单规则使用哪条引物的 Tm？ 使用正向和反向引物中较低的 Tm，再减去 5°C。 ### Rychlik 公式需要哪些输入？ 需要两条引物的 Tm 和 PCR 产物的 Tm。 ### 为什么要输入产物 Tm？ Rychlik 公式会将引物 Tm 和产物 Tm 一起纳入计算，产物 Tm 通常约为 75–90°C。 ### 梯度范围如何确定？ 工具以推荐 Ta 为中心，输出上下各 3°C 的范围。 ### 两条引物的 Tm 相差多少比较合适？ 建议控制在 2–3°C 内，并按较低的引物 Tm 设定退火温度。 ## 相关工具 - [常染色体显性遗传系谱分析器](https://elysiatools.com/zh/tools/autosomal-dominant-pedigree): 计算常染色体显性（AD）遗传的子代风险并评估观察数据与预期比例的拟合度。亲本基因型组合决定预期患病比例：AA × 任意 = 全部患病；Aa × Aa = 3:1（75%）；Aa × aa = 1:1（50%）；aa × aa = 无。观察计数可做卡方检验（df = 1，α = 0.05 临界值 3.841）。系谱特征清单：垂直传递（代代出现）、两性患病率相近、父传子存在（可排除 X 连锁显性）、未患病者一般不传递（除新发突变）。示例疾病：亨廷顿病、软骨发育不全、马凡综合征。来源：Griffiths、Hartl & Clark 2007、StatPearls、OMIM。仅供教学用途。 - [常染色体隐性遗传风险计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/autosomal-recessive-risk): 计算常染色体隐性遗传病在每个孩子及 n 个孩子中的患病概率。患病孩子（aa）必须从父母双方各得一个隐性等位基因：P(子代患病) = P(亲本1传 a) × P(亲本2传 a)。支持亲本状态：携带者（Aa）、患者（aa）、非携带者（AA）、未知（由群体携带率 c 推断：P(Aa)=c、P(aa)=c²）。双携带者 → 每胎 25% 患病、50% 携带、未患病子女为携带者的概率 2/3；n 个孩子至少一个患病 = 1 − (1−r)^n。默认携带率 0.04（北欧裔囊性纤维化 1/25）。来源：Griffiths、Hartl & Clark 2007、StatPearls。仅供教学用途，不能替代遗传咨询。 - [血球计数板细胞计数计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/cell-counting-hemocytometer): 把血球计数板（改良 Neubauer）的原始计数换算为细胞浓度：cells/mL =（计数总数 ÷ 大方格数）× 稀释倍数 × 10⁴（每个 1 mm² 大方格在 0.1 mm 深度下容积恰为 0.1 µL）。输入计数总数、方格数（通常 4 个角格或加中央共 5 格）与稀释倍数，可选填样品体积以得到总细胞数；并按每格 20–100 个细胞的理想密度给出操作建议。来源：Freshney 细胞培养手册、Neubauer 改良室几何规格。仅供教学与实验规划。 - [细胞倍增时间计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/cell-doubling-time): 由两次细胞计数计算指数生长期动力学：倍增时间 t_d = ln2 × t ÷ ln(Nₜ/N₀)，同时给出倍增次数 n = ln(Nₜ/N₀) ÷ ln2 与比生长速率 μ = ln(Nₜ/N₀)/t（h⁻¹）。N₀/Nₜ 可为细胞数或任意一致单位的密度，时间支持小时/天/分钟。前提是两点都处于对数期（接种低于汇合、收获早于接触抑制），否则 t_d 会偏高；并附 HEK293/HeLa/CHO 常见倍增时间参照。来源：Freshney 细胞培养手册。仅供教学与实验规划。 - [台盼蓝细胞活力计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/cell-viability-trypan-blue): 由台盼蓝拒染试验的活/死细胞计数计算活力：活力 % = 活 ÷（活 + 死）× 100；活细胞浓度 = 活细胞计数 × 稀释倍数 × 10⁴ ÷ 大方格数。台盼蓝不能透过完整细胞膜，活细胞明亮未着色、膜受损细胞染成深蓝。结果附培养状态判读（≥90% 健康、70–90% 可接受、<70% 受损）与操作要点（染色后 3–5 分钟内计数，暴露过久会杀死活细胞）。来源：Freshney《Culture of Animal Cells》、Strober 拒染试验方案。仅供教学与实验规划。 - [CFU/mL 菌落形成单位计算器](https://elysiatools.com/zh/tools/cfu-calculator): 把平板菌落计数换算为原始培养物浓度：CFU/mL = 菌落数 × 10ⁿ ÷ 接种体积（mL），其中平皿接种自 10⁻ⁿ 稀释管。内置标准可计数范围 30–300 个/皿的判读：>300 提示 TNTC（过多无法计数，需加大稀释度），<30 提示 TFTC（过少误差大，需降低稀释度），0 个菌落给出检测限 LOD；可选填原始样品体积换算总 CFU。来源：Standard Methods 平板计数法、FDA BAM。仅供教学与实验规划。 - [DNA 拷贝数计算器（浓度 → 拷贝数）](https://elysiatools.com/zh/tools/dna-copy-number-calculator): 把 DNA 质量浓度换算成每微升分子拷贝数：copies/µL = 浓度(g/µL) × 阿伏伽德罗常数 ÷ (长度bp × 660 g/mol)。支持 ng/µL（NanoDrop 常用，与 µg/mL 等值）、pg/µL（Qubit 量程）与 µg/µL；附 pmol/µL 摩尔量换算与可选体积的总拷贝数。参考值：5000 bp 质粒 50 ng/µL → 9.12×10⁹ 拷贝/µL（0.0152 pmol/µL）。提醒：660 Da/bp 为平均值，对质粒/基因组/扩增片段足够精确，精确寡核苷酸请逐碱基求和；A260 会因 RNA/游离核苷酸污染而高估，准确定量建议用荧光染料法。来源：SI 2019 阿伏伽德罗常数、Thermo Fisher 惯例、Sambrook & Russell。仅供实验规划。 - [酶活力单位计算器（U，µmol/min）](https://elysiatools.com/zh/tools/enzyme-activity-unit): 把原始测定数据换算为酶活力单位：1 U = 1 µmol/min（IUB 1978），1 U = 16.67 nkat。两种输入：产物生成量（µmol）÷ 时间（min）；或按 Beer–Lambert 从 ΔA/min、ε（mM⁻¹cm⁻¹，如 NADH 340 nm 处 6.22）、光程与反应体积计算 U = ΔA/min × V(mL) ÷ (ε×l)。附 mU/nkat/µkat 换算与吸光度线性窗口（0.05–1.0 AU）提示。来源：IUB 命名委员会、BIPM katal、Segel《Biochemical Calculations》。仅供教学与实验规划。 ## 示例 - [Web Python 图像处理示例](https://elysiatools.com/zh/samples/web-image-processing-python): Web Python 图像处理示例，使用 PIL/Pillow 包括读取、保存、缩放和格式转换 - [Android Java 图像处理示例](https://elysiatools.com/zh/samples/android-image-processing-java): Android Java 图像处理示例，包括图像读取保存、缩放和格式转换 - [Android Kotlin 图像处理示例](https://elysiatools.com/zh/samples/android-image-processing-kotlin): Android Kotlin 图像处理示例，包括图像读取保存、缩放和格式转换 - [Web Rust 图像处理示例](https://elysiatools.com/zh/samples/web-image-processing-rust): Web Rust 图像处理示例，包括图像读取保存、缩放和格式转换 ## 相关内容 - [音频编码与格式转换工具](https://elysiatools.com/zh/hubs/audio-convert): 在一个专题里比较音频格式转换、码率调整、采样率转换、编码切换和导出工具，适合交付与归档工作流。 - [图片格式转换与动画导出工具](https://elysiatools.com/zh/hubs/image-convert): 在一个专题里比较 JPG、PNG、GIF、AVIF、WebP、TIFF、ICO、base64 以及动画导出相关的图片格式转换工具。 - [JSON 交换与格式翻译工具](https://elysiatools.com/zh/hubs/json-convert): 在一个专题里比较 JSON 与 CSV、YAML、TOML、GraphQL、XML、Markdown、Excel、BSON、EDN 等结构化格式之间的转换工具。 - [面向网页与印刷的色彩空间转换工具](https://elysiatools.com/zh/hubs/design-convert): 围绕网页到印刷的色彩空间转换整理的一组工具。