# Calculadora de Tm de primers PCR (Wallace / vizinhos mais próximos)

Calcula a temperatura de fusão (Tm) de um primer de PCR por dois métodos, ambos exibidos: a regra de Wallace Tm = 2°C×(A+T) + 4°C×(G+C) (estimativa rápida para oligos curtos <14 nt, ignora contexto, concentração e sal) e o método termodinâmico de vizinhos mais próximos unificado de SantaLucia 1998: Tm = 1000ΔH/(ΔS + R·ln(Ct/4) + 0.368(N−1)·ln[Na+]) − 273.15 — com 16 parâmetros de empilhamento, termos de iniciação terminal e correção de simetria para autorcomplementares; concentração de primer e de sódio ajustáveis (família usada pelo Primer3). Também fornece conteúdo GC, composição de bases e Ta sugerida = Tm − 5°C. Fontes: Wallace 1979, SantaLucia 1998, Breslauer 1986, Primer3 2012. Apenas para triagem inicial.

> Página canônica: https://elysiatools.com/pt/tools/pcr-primer-tm

- **Categoria:** Education

- **Palavras-chave:** calculadora tm primer, temperatura de fusão, regra de wallace, tm vizinhos mais próximos, termodinâmica santalucia, design de primers, conteúdo gc, temperatura de anelamento, primer pcr, tm oligonucleotídeo, primer3, pcr

## Visão geral

A Calculadora de Tm de primers PCR estima a temperatura de fusão de uma sequência de DNA de 5 a 60 nt usando a regra de Wallace ou o método termodinâmico de vizinhos mais próximos de SantaLucia 1998. Ela também informa o conteúdo GC, a composição de bases e uma temperatura de anelamento inicial sugerida, calculada como Tm − 5 °C.

## Entradas

- **Sequência do primer (5'→3')** (text): DNA primer sequence, A/C/G/T only (case-insensitive); 5–60 nt.
- **Método de Tm** (select): Wallace for a quick short-oligo estimate; nearest-neighbor is the standard for primer design.
- **Concentração do primer (nM)** (number): Primer strand concentration (nearest-neighbor method only).
- **Concentração de sódio (mM)** (number): \[Na+\] of the reaction buffer (nearest-neighbor method only).
- **Casas decimais** (number)

## Quando usar

- Para fazer uma triagem inicial da temperatura de fusão de um primer de PCR.
- Para comparar a estimativa rápida de Wallace com o cálculo de vizinhos mais próximos.
- Para avaliar o efeito da concentração do primer e do sódio no cálculo termodinâmico.

## Como funciona

- Insira a sequência do primer no sentido 5'→3', usando apenas as bases A, C, G e T, com 5 a 60 nucleotídeos.
- Escolha entre a regra de Wallace e o método de vizinhos mais próximos de SantaLucia 1998.
- Ao usar vizinhos mais próximos, informe a concentração do primer em nM e a concentração de sódio em mM.
- A ferramenta calcula a Tm selecionada, exibe também a Tm pelo outro método, informa o conteúdo GC e sugere Ta = Tm − 5 °C.

## Casos de uso

- Triagem de primers forward e reverse antes de uma reação de PCR.
- Comparação de primers com diferentes conteúdos GC e comprimentos.
- Ajuste inicial da temperatura de anelamento com base nas condições de concentração e sal.

## Perguntas frequentes

### Que sequências posso inserir?

A sequência deve conter somente A, C, G e T, sem distinção entre maiúsculas e minúsculas, e ter de 5 a 60 nt.

### Qual é a diferença entre Wallace e vizinhos mais próximos?

Wallace usa a fórmula rápida 2 °C para A/T e 4 °C para G/C. Vizinhos mais próximos considera empilhamento de bases, concentração do primer e sódio.

### Quando devo usar a regra de Wallace?

Ela é útil para uma estimativa rápida de oligos curtos, especialmente com menos de 14 nt, mas ignora contexto, concentração e sal.

### Por que informar a concentração do primer e do sódio?

Esses valores são usados pelo método de vizinhos mais próximos para ajustar o cálculo termodinâmico da Tm.

### A Ta sugerida é uma temperatura definitiva para a PCR?

Não. Ela é apenas um ponto de partida, calculado como Tm − 5 °C, e deve ser confirmada experimentalmente ou com ferramentas específicas.

## Ferramentas relacionadas

- [Conversor Absorbância↔Transmitância (A = −log₁₀T)](https://elysiatools.com/pt/tools/absorbance-transmittance-converter): Converte nos dois sentidos entre absorbância e transmitância: A = −log₁₀(T), T = 10⁻ᴬ, %T = 100·T e A = 2 − log₁₀(%T). Aceita absorbância A, transmitância percentual %T ou transmitância fracionária T e devolve as três representações de uma vez. Referências: A=0 → %T=100; A=1 → %T=10; A=0,301 → %T=50. Absorbância negativa implicaria %T > 100 %, impossível na espectrofotometria padrão, e é rejeitada.
- [Calculadora de temperatura de anelamento PCR (Ta = Tm − 5°C)](https://elysiatools.com/pt/tools/annealing-temperature-calculator): Calcula a temperatura de anelamento (Ta) da PCR por duas regras: a regra simples de bancada Ta = Tm − 5°C (usando o MENOR Tm do par de primers) e a fórmula empírica de Rychlik 1990: Ta = 0.3×Tm(primer) + 0.7×Tm(produto) − 14.9 (o Tm do produto costuma ser 75–90°C e a fórmula fica 1–8°C acima da regra simples em pares típicos). Fornece a Ta recomendada, faixa de gradiente ±3°C e a direção de ajuste: Ta baixa dá bandas inespecíficas e dímeros, alta sem produto; mantenha os dois Tm dentro de 2–3°C e anele pelo menor. Fontes: Rychlik 1990, Innis & Gelfand 1990, Lorenz 2012. Apenas planejamento experimental.
- [Analisador de pedigree de herança autossômica dominante](https://elysiatools.com/pt/tools/autosomal-dominant-pedigree): Calcula o risco na descendência para herança autossômica dominante (AD) e avalia o ajuste das contagens observadas à proporção esperada. Genótipos parentais → proporção esperada: AA × qualquer = todos afetados; Aa × Aa = 3:1 (75%); Aa × aa = 1:1 (50%); aa × aa = nenhum. Contagens observadas permitem um teste qui-quadrado (df = 1, crítico 3.841). Marcas do pedigree AD: transmissão vertical, ambos os sexos igualmente afetados, transmissão homem-para-homem presente (exclui dominante ligado ao X), não afetados não transmitem (exceto mutação de novo). Exemplos: Huntington, acondroplasia, Marfan. Fontes: Griffiths, Hartl & Clark 2007, StatPearls, OMIM. Apenas uso educativo.
- [Calculadora de risco de herança autossômica recessiva](https://elysiatools.com/pt/tools/autosomal-recessive-risk): Calcula a probabilidade de uma criança (ou pelo menos uma de n crianças) ser afetada por uma doença autossômica recessiva. Uma criança afetada (aa) deve receber um alelo recessivo de AMBOS os progenitores: P(criança afetada) = P(progenitor 1 transmite a) × P(progenitor 2 transmite a). Estados: portador (Aa), afetado (aa), não portador (AA), desconhecido (P(Aa)=c, P(aa)=c² pela frequência populacional). Dois portadores → 25% por filho, 50% portadores, P(portador | não afetado) = 2/3; pelo menos um de n = 1 − (1−r)^n. Padrão 0.04 (fibrose cística 1/25). Fontes: Griffiths, Hartl & Clark 2007, StatPearls. Apenas uso educativo, não substitui aconselhamento genético.
- [Calculadora de contagem celular em hemocitômetro](https://elysiatools.com/pt/tools/cell-counting-hemocytometer): Converte contagens brutas da câmara de Neubauer melhorada em concentração: células/mL = (total contadas ÷ quadrados) × diluição × 10⁴ (cada quadrado de 1 mm² com 0,1 mm de profundidade contém exatamente 0,1 µL). Informe o total contado, o número de quadrados (geralmente 4 cantos ou 5 com o central) e a diluição; opcionalmente o volume para o total de células. Inclui conselhos pela densidade ideal de 20–100 células por quadrado. Fontes: manual Freshney, geometria Neubauer. Apenas para educação.
- [Conversor de Densidade Celular (células/mL↔células/µL↔10⁶/mL↔10¹²/L)](https://elysiatools.com/pt/tools/cell-density-unit-converter): Conversão completa entre unidades de densidade celular: células/L, células/mL, células/µL, 10³ células/µL, 10⁶ células/mL, 10⁹ células/L e 10¹² células/L. Cobre tanto cultivo celular (p. ex. E. coli 5×10⁸ células/mL = 500 ×10⁶ células/mL) quanto laudos hematológicos (eritrócitos 4,9×10¹²/L = 4,9×10⁶ células/µL; leucócitos 6,5×10⁹/L = 6 500 células/µL) e devolve a tabela completa de unidades. Ferramenta complementar: calculadora OD600.
- [Calculadora de tempo de duplicação celular](https://elysiatools.com/pt/tools/cell-doubling-time): Calcula a cinética de crescimento exponencial a partir de duas contagens: tempo de duplicação t_d = ln2 × t ÷ ln(Nₜ/N₀), número de duplicações n = ln(Nₜ/N₀) ÷ ln2 e taxa específica μ = ln(Nₜ/N₀)/t (h⁻¹). N₀ e Nₜ podem ser números de células ou densidades em qualquer unidade consistente; o tempo aceita horas/dias/minutos. Pressupõe fase log em ambos os pontos (semeadura subconfluente, colheita antes da inibição por contato), senão t_d sai alto; inclui referências de HEK293/HeLa/CHO. Fonte: manual Freshney. Apenas para educação.
- [Calculadora de viabilidade celular com azul de tripan](https://elysiatools.com/pt/tools/cell-viability-trypan-blue): Calcula a viabilidade a partir das contagens de células vivas/mortas no teste de exclusão do azul de tripan: viabilidade % = vivas ÷ (vivas + mortas) × 100; concentração de vivas = contagem × diluição × 10⁴ ÷ quadrados. O corante não atravessa membranas intactas: as vivas ficam brilhantes e as lesadas coram-se de azul intenso. Inclui leitura do estado da cultura (≥90% saudável, 70–90% aceitável, <70% estressada) e dicas de protocolo (contar em 3–5 min; exposição prolongada mata células viáveis). Fontes: Freshney, protocolo de Strober. Apenas para educação.

## Exemplos

- [Exemplos de Processamento de Imagem Web Python](https://elysiatools.com/pt/samples/web-image-processing-python): Exemplos de processamento de imagem Web Python usando PIL/Pillow incluindo leitura, salvamento, redimensionamento e conversão de formato
- [Exemplos de Processamento de Imagem Android Java](https://elysiatools.com/pt/samples/android-image-processing-java): Exemplos de processamento de imagem Android Java incluindo leitura/escrita, dimensionamento e conversão de formato
- [Exemplos de Processamento de Imagem Android Kotlin](https://elysiatools.com/pt/samples/android-image-processing-kotlin): Exemplos de processamento de imagem Android Kotlin incluindo leitura/escrita, dimensionamento e conversão de formato
- [Exemplos de Processamento de Imagem Web Rust](https://elysiatools.com/pt/samples/web-image-processing-rust): Exemplos de processamento de imagem Web Rust incluindo leitura/gravação, redimensionamento e conversão de formato