# Quantification par absorbance et calculs acido-basiques

Changez des lectures d'appareil en concentrations défendables — passez de l'absorbance à la transmittance et retour, résolvez la loi de Beer-Lambert pour la variable manquante, parcourez la chaîne des acides nucléiques de A260 aux microgrammes aux nanomolaires aux copies par microlitre, prédisez le pH depuis les concentrations d'acides et de bases fortes, concevez des tampons par Henderson-Hasselbalch et vérifiez la dissociation par la conductivité molaire.

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- **Mots-clés:** absorbance en transmittance, calculatrice loi Beer Lambert, coefficient d extinction molaire, concentration ADN A260, nombre de copies ADN, calculatrice pH acide fort, tampon Henderson Hasselbalch, conductivité molaire dissociation

## Questions fréquentes

### Pourquoi convertir la transmittance si l'appareil affiche l'absorbance ?

Parce que tous ne l'affichent pas, et parce que le contrôle est gratuit — la transmittance est ce que le photomètre mesure physiquement, l'absorbance en est le logarithme, et un appareil qui rapporte deux valeurs en désaccord rapporte un défaut d'étalonnage. Convertir à la main une fois prouve que la conversion de l'appareil lui-même reste honnête.

### Quand la règle A260 suffit-elle ?

Pour le travail courant où la composition de la séquence est inconnue ou sans importance — la convention des cinquante microgrammes par millilitre pour l'ADN double brin suffit pour les décisions de charge et les contrôles de pureté. Quand le nombre alimente une réaction molaire — un test enzymatique, une transfection — passez par le coefficient d'extinction, car la composition en bases déplace la valeur réelle de dizaines de pour cent.

### Pourquoi mon calcul de tampon ne fait-il confiance qu'à pKa plus ou moins un ?

Parce que la capacité tampon s'effondre hors de cette fenêtre — Henderson-Hasselbalch calculera sans broncher un pH de 9 depuis un pKa de 4,5, mais à cette proportion il ne reste presque plus de couple conjugué pour absorber l'acide ou la base ajoutés. L'équation rapporte un nombre ; la fenêtre est ce qui fait de ce nombre un tampon.

### Qu'apporte la conductivité que le pH n'apporte pas ?

Une preuve indépendante de la dissociation. Le pH rapporte l'ion hydrogène ; la conductivité molaire rapporte combien du soluté porte une charge — le rapport à la conductivité limite donne le degré de dissociation et, avec lui, la constante de dissociation. Un acide faible dont le pH et la conductivité racontent la même histoire est un acide faible mesuré, non supposé.

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