# Herramientas de cuantificación de proteínas, cinética enzimática y análisis de secuencias Planifica ensayos de proteínas, convierte concentraciones y analiza secuencias, actividad, cinética, inhibición y unión en un solo flujo de laboratorio. > Página canónica: https://elysiatools.com/es/hubs/protein-quantification-enzyme-kinetics-sequence-tools - **Categoría:** analyze-calculate - **Palabras clave:** herramientas cuantificación proteína, calculadora ensayo BCA, calculadora ensayo Bradford, calculadora cinética enzimática, calculadora kcat, calculadora Ki IC50, masa molecular proteína, calculadora pI proteína, conversor concentración proteína, actividad específica ## Descripción general Este hub sigue el recorrido habitual de un laboratorio de proteínas, desde una secuencia o péptido hasta una muestra cuantificada y caracterizada. Estima masa molecular, composición, pI y coeficiente de extinción; cuantifica con lecturas Bradford o BCA; y conecta actividad enzimática, actividad específica, kcat, Km, Ki, eficiencia catalítica y afinidad de unión. Las herramientas muestran unidades y supuestos para planificación, aprendizaje y comprobación de resultados. ## Herramientas - Analizador de composición de aminoácidos: Analiza la composición de una secuencia: recuentos y porcentajes molares de cada uno de los 20 aminoácidos estándar; totales por grupo (básicos K/R/H, ácidos D/E, aromáticos F/W/Y, azufrados C/M, alifáticos A/I/L/V, amidas N/Q, hidroxilo S/T, otros G/P); GRAVY con los valores de hidropatía de Kyte–Doolittle 1982 (>0 tendencia hidrofóbica, <0 hidrofílica; las globulares solubles suelen estar entre −1 y +0,3); y el peso molecular con la tabla de masas medias de ProtParam. Los códigos ambiguos (B/J/O/U/X/Z) se cuentan aparte y se excluyen de los porcentajes. Fuentes: Kyte & Doolittle 1982, ExPASy ProtParam, Lehninger. Solo para educación. - Calculadora del ensayo BCA (curva estándar): Cuantifica proteína por el método BCA (ácido bicincronínico, 562 nm) con curva estándar: pegue las líneas «concentración(µg/mL), A562» y las absorbancias desconocidas; la herramienta ajusta por mínimos cuadrados (pendiente, ordenada, R²), invierte c = (A−b)/m y multiplica por la dilución, devolviendo µg/mL y mg/mL. Las lecturas fuera del rango se marcan como extrapolación; las inferiores al blanco se rechazan. Claves del BCA: tolera ~5% de detergente (mejor que Bradford para lisados); pero DTT/TCEP/β-mercaptoetanol (>1 mM) y EDTA alto reducen o quelan Cu²⁺ e inflan la lectura — elimínelos antes; rango útil ~20–2000 µg/mL (Micro BCA 0,5–20). Fuente: Smith 1985 Anal Biochem. Solo para educación. - Calculadora del ensayo de Bradford (curva estándar de BSA): Cuantifica proteína por el método de Bradford (Coomassie G-250, 595 nm) con curva estándar de BSA: pegue las líneas «concentración(µg/mL), A595» de los estándares y las absorbancias desconocidas; la herramienta ajusta por mínimos cuadrados (pendiente, ordenada, R²), invierte c = (A−b)/m y multiplica por el factor de dilución, devolviendo µg/mL y mg/mL. Las lecturas fuera del rango del estándar se marcan como extrapolación; las inferiores al blanco se rechazan como no cuantificables. Clave: la respuesta del colorante varía mucho según la proteína (BSA ≈ el doble que IgG) y los detergentes altos interfieren; use el mismo tampón para estándares y muestras. Fuente: Bradford 1976 Anal Biochem. Solo para educación. - Calculadora de unidad de actividad enzimática (U, µmol/min): Convierte datos brutos de ensayo en unidades de actividad enzimática: 1 U = 1 µmol/min (IUB 1978), 1 U = 16,67 nkat. Dos entradas: producto formado (µmol) ÷ tiempo (min); o por Beer–Lambert con ΔA/min, ε (mM⁻¹cm⁻¹, p. ej. NADH 6,22 a 340 nm), trayecto óptico y volumen: U = ΔA/min × V(mL) ÷ (ε×l). Incluye conversión a mU/nkat/µkat y el aviso de la ventana lineal de absorbancia (0,05–1,0 AU). Fuentes: comité de nomenclatura IUB, BIPM katal, Segel Biochemical Calculations. Solo para educación y planificación. - Calculadora de eficiencia catalítica (kcat/Km): Calcula la eficiencia catalítica kcat/Km (M⁻¹s⁻¹) — la constante aparente de segundo orden a bajo sustrato y la forma justa de comparar la preferencia de una enzima por distintos sustratos. Dos entradas: kcat directo (s⁻¹ o min⁻¹) y Km (nM/µM/mM); o desde Vmax(µM/min) ÷ \[E\](µM) para obtener kcat y dividir por Km. Bandas (M⁻¹s⁻¹): <10³ ineficiente (sospeche sustrato equivocado o artefacto), 10³–10⁵ modesta, 10⁵–10⁷ eficiente (enzimas bien evolucionadas), 10⁷–10⁸ muy eficiente, ≥10⁸ cerca del límite de difusión (10⁸–10⁹), «catalíticamente perfecta» (triofosfato isomerasa, anhidrasa carbónica, acetilcolinesterasa). Válida solo en estado estacionario con Km ≫ \[E\]. Fuentes: Fersht, Knowles & Albery 1977, Radzicka & Wolfenden 1995. Solo para educación. - Calculadora de la constante de inhibición Ki e IC50 (Cheng–Prusoff): Convierte entre IC50 y Ki según Cheng–Prusoff: competitiva Ki = IC50 ÷ (1+\[S\]/Km), incompetitiva Ki′ = IC50 ÷ (1+Km/\[S\]) (se une al complejo ES), no competitiva pura Ki = IC50 (independiente de \[S\]); también en sentido inverso de Ki a IC50. Clave: el IC50 NO es constante — el de un competitivo sube con \[S\]; con \[S\] = Km, Ki = IC50/2, y todo IC50 debe reportarse con \[S\] y Km. Bandas de Ki (nM): <1 muy potente, 1–100 potente (inhibidores farmacológicos típicos), 100–1000 moderado, >1000 débil. Supone inhibición reversible en equilibrio, cinética michaeliana y no unión estrecha (para unión estrecha use la ecuación de Morrison); confirme el mecanismo por ajuste global, no lo asuma. Fuentes: Cheng & Prusoff 1973, Copeland. Solo para educación. - Calculadora de Cinética Enzimática: Calcula la velocidad de reacción con la ecuación de Michaelis-Menten v = Vmax·\[S\]/(Km+\[S\]), o estima Km y Vmax a partir de datos (S, v) mediante Lineweaver-Burk; simula inhibición competitiva/no competitiva. - Calculadora del número de recambio enzimático (kcat): Calcula el número de recambio kcat = Vmax ÷ \[E\]total, en min⁻¹ y s⁻¹. Tres entradas: Vmax(µmol/min) ÷ cantidad de enzima(µmol); Vmax(µM/min) ÷ \[E\](µM); o desde concentración de proteína(mg/mL) y peso molecular(kDa), \[E\](µM) = 1000×c÷PM (1 mg/mL de una proteína de 1 kDa = 1000 µM) y luego kcat. Bandas (s⁻¹): <0,01 muy lenta, 0,01–1 lenta, 1–100 moderada (enzimas metabólicas típicas), 100–10⁴ rápida, >10⁴ muy rápida (catalasa ≈4×10⁷ s⁻¹). \[E\] debe contar centros activos (n-mero × n). Fuentes: Michaelis-Menten 1913, Fersht, Lehninger. Solo para educación. - Conversor de unidades de actividad enzimática (U ↔ katal): Convierte con exactitud entre unidades de actividad enzimática: 1 U = 1 µmol/min (IUB 1978), 1 kat = 1 mol/s (BIPM 1999), luego 1 U = 16,667 nkat, 1 µkat = 60 U y 1 kat = 6×10⁷ U. Introduzca un valor en U/mU/µU o kat/mkat/µkat/nkat/pkat y obtenga la misma actividad en todas las demás unidades a la vez. Conversión pura de escala, sin supuestos de ensayo, útil para manuscritos y fichas técnicas. Fuentes: comité de nomenclatura IUB, BIPM 21.ª CGPM, libro verde IUPAC. Solo para educación. - Calculadora de masa de péptidos (monoisotópica/media): Calcula la masa de un péptido sumando residuos: M = Σ masas de residuo + H₂O (tabla ExPASy ProtParam). Dos modos: monoisotópica (H₂O = 18,01056, ideal para péptidos cortos en MS de alta resolución) o promedio (H₂O = 18,01524, para cadenas más largas), con los iones \[M+H\]⁺, \[M+Na\]⁺ y \[M+2H\]²⁺. La secuencia no distingue mayúsculas y se ignoran espacios y separadores; los códigos ambiguos B/J/O/U/X/Z se rechazan. Fuente: ExPASy ProtParam (Gasteiger 2005). Solo para educación. - Conversor de unidades de concentración de proteína (mg/mL ↔ µM ↔ %): Conversión integral de unidades de concentración de proteína: µM = mg/mL × 1000 ÷ PM(kDa); 1% p/v = 10 mg/mL = 1 g/L; 1 µM = 1 pmol/µL. Introduzca la concentración, elija la unidad (mg/mL, µg/mL, g/L, % p/v, µM, nM, mM, pmol/µL) y el peso molecular (kDa), y obtendrá las 8 unidades a la vez. Referencias: BSA (66,4 kDa) a 10 mg/mL ≈ 151 µM; una proteína de 50 kDa a 100 µM = 5 mg/mL. Fuentes: prefijos SI y convención % p/v, tablas Thermo Pierce, NEBioCalculator. Solo para educación. - Calculadora de afinidad proteína-ADN (estimación de Kd): Estima el Kd a partir de un punto según el equilibrio 1:1: con proteína en exceso, f = \[P\]÷(\[P\]+Kd), luego Kd = \[P\]×(1−f)÷f; con f = 0.5 el Kd iguala la concentración de proteína. Dos entradas: fracción unida directa (0–1) o anisotropía de fluorescencia f = (r−rlibre)÷(rligado−rlibre). Añade ΔG° = RT·ln(Kd) (25 °C por defecto). Bandas: <1 nM muy fuerte, 1–100 nM fuerte (dianas típicas de factores transcripcionales), 100 nM–1 µM moderado, >1 µM débil (revisar sal y competidor poly(dI-dC)). Supuestos: equilibrio, 1:1, proteína en gran exceso; para curvas completas ajuste la titulación entera. Fuentes: Cantor & Schimmel, Heyduk & Lee 1990, Lakowicz. Solo para educación. - Calculadora del coeficiente de extinción proteico (ε280): Calcula ε280 según Pace 1995 / Gill & von Hippel 1989: ε280 = 5500×nTrp + 1490×nTyr + 125×ncistina (M⁻¹cm⁻¹, error típico ±5%). Las cistinas son pares de Cys unidos por puente disulfuro y solo cuentan en estado oxidado (⌊Cys/2⌋); la herramienta devuelve los valores totalmente reducido y totalmente oxidado para acotar el estado real. El modo secuencia cuenta W/Y/C y calcula el peso molecular con las masas medias de ProtParam; el modo recuento toma números de residuos y un peso opcional. Incluye A0.1% = ε/PM (absorbancia de 1 mg/mL), es decir c = A/ε para volver de la lectura al concentrado. Ojo: proteínas sin Trp/Tyr tienen ε280 casi nulo (use A205 o BCA) y corrija la contaminación de ácidos nucleicos (A260). Fuentes: Pace 1995, Gill & von Hippel 1989, ExPASy ProtParam. Solo para educación. - Calculadora del punto isoeléctrico de proteínas (pI): Calcula el punto isoeléctrico teórico a partir de la composición de aminoácidos: carga neta por Henderson–Hasselbalch en cada grupo ionizable (conjunto pKa simplificado de ExPASy/Bjellqvist: N-term 7.5, K 10.0, R 12.0, H 5.98; C-term 3.55, D 4.05, E 4.45, C 9.0, Y 10.0) y bisección hasta la carga cero. También devuelve la carga neta a pH fisiológico 7.4, el peso molecular medio (tabla de masas de ProtParam + agua) y la lectura ácida/básica. Limitaciones: pKa de cadena desplegada, sin modificaciones postraduccionales; el conjunto de pKa y el algoritmo de bisección son idénticos a Biopython IsoelectricPoint (resultados numéricamente iguales), mientras que el conjunto completo de Bjellqvist de ExPASy distingue residuos terminales y puede diferir ligeramente. Fuentes: Bjellqvist 1993, Gasteiger 2003 (ExPASy), Biopython IsoelectricPoint. Solo para educación. - Calculadora de peso molecular de proteínas (por secuencia): Calcula el peso molecular de una proteína a partir de su secuencia: MW = Σ masas promedio de residuos + H₂O (18,01524 Da), con la misma tabla que ExPASy ProtParam (A 71,0788 … W 186,2132). La entrada no distingue mayúsculas y se limpian espacios y separadores * - .; los códigos ambiguos (B/J/O/U/X/Z) no se suman pero se cuentan y reportan. El resultado es la cadena polipeptídica sin modificar: sin eliminación de péptido señal, puentes disulfuro (−2H por puente), PTMs ni etiquetas. Devuelve kDa, masa media por residuo y longitud. Fuentes: ExPASy ProtParam (Gasteiger 2005), manual de Fasman. Solo para educación. - Calculadora de actividad específica (U/mg de proteína): Calcula la actividad específica = actividad(U) ÷ masa de proteína(mg), o directamente concentración de actividad(U/mL) ÷ concentración de proteína(mg/mL). Devuelve U/mg, nkat/mg y µkat/mg. Es una métrica de pureza: sube durante la purificación y el máximo del enzima puro es kcat(min⁻¹) ÷ MW(kDa) (p. ej. kcat 600 min⁻¹ y 60 kDa → 10 U/mg); el cociente medido/teórico estima la pureza. Exige que ensayo de actividad y dosaje de proteína (Bradford/BCA/A280) estén en rango lineal. Fuentes: nomenclatura IUBMB, Scopes Protein Purification, Lehninger. Solo para educación. ## Preguntas frecuentes ### ¿Qué tareas de laboratorio de proteínas cubre este hub? Cubre propiedades de secuencia, masa de péptidos y proteínas, conversión de concentración, curvas Bradford y BCA, actividad y cinética enzimática, potencia de inhibidores, actividad específica y estimaciones de unión proteína-ADN. ### ¿Cuándo debo usar Bradford, BCA o A280? Su compatibilidad depende de la matriz. Bradford puede ser sensible a la composición proteica y detergentes; BCA suele tolerar mejor detergentes pero se afecta por reductores; A280 depende de residuos aromáticos y de corregir ácidos nucleicos. Revise las advertencias y valide con un estándar apropiado. ### ¿Sustituyen estas calculadoras un protocolo de ensayo? No. Calculan a partir de los valores introducidos. Los resultados fiables requieren estándares, blancos, réplicas, comprobaciones de rango lineal y controles específicos del protocolo. ## Contenido relacionado - [Herramientas de calculo y referencia para laboratorio de quimica](https://elysiatools.com/es/hubs/chemistry-lab-calculations-and-reference): Reune balanceo de ecuaciones, masa molar, diluciones, consulta de elementos y normalizacion de medidas de laboratorio en un solo hub de trabajo de quimica. - [Calculadoras de Farmacocinética y Planificación de Dosis](https://elysiatools.com/es/hubs/pharmacokinetic-dose-planning-calculators): Explora biodisponibilidad, aclaramiento, vida media, volumen de distribución, dosis de carga y mantenimiento, infusión, estado estacionario y monitorización terapéutica en un flujo educativo. - [Calculadoras de gases sanguíneos, oxigenación y hemodinámica en cuidados críticos](https://elysiatools.com/es/hubs/critical-care-blood-gas-oxygenation-hemodynamics): Conecta cálculos de gasometría arterial, equilibrio ácido-base, oxigenación, gasto cardíaco y resistencia vascular en un flujo de cuidados críticos. - [Calculadoras de fisica para clase y laboratorio](https://elysiatools.com/es/hubs/physics-classroom-and-lab-calculators): Reune herramientas de fuerza, energia, movimiento, flotacion, presion, ondas, decibelios y precision de medida en un hub enfocado para estudio y laboratorio de fisica.